第一篇：C反应蛋白定量检测试剂盒产品注册技术审查指导原则
附件6 C反应蛋白定量检测试剂盒 产品注册技术审查指导原则 本指导原则旨在指导注册申请人对C反应蛋白定量检测试剂盒注册申报资料的准备及撰写，同时也为技术审评部门对注册申报资料的技术审评提供参考。
本指导原则是对C反应蛋白定量检测试剂盒的一般要求，申请人应依据产品的具体特性确定其中内容是否适用，若不适用，需具体阐述理由及相应的科学依据，并依据产品的具体特性对注册申报资料的内容进行充实和细化。
本指导原则是对申请人和审查人员的指导性文件，但不包括注册审批所涉及的行政事项，亦不作为法规强制执行，如果有能够满足相关法规要求的其他方法，也可以采用，但需要提供详细的研究资料和验证资料，相关人员应在遵循相关法规的前提下使用本指导原则。
本指导原则是在现行法规和标准体系以及当前认知水平下制定的，随着法规和标准的不断完善，以及科学技术的不断发展，本指导原则相关内容也将适时进行调整。
一、范围 C反应蛋白定量检测试剂盒是指利用免疫比浊法、化学发光法、时间分辨法、免疫荧光法等基于抗原抗体反应原理的免疫学方法对人全血、血清、血浆或其他体液中的C反应蛋白进行体外定量测定的试剂。
二、注册申报资料要求 （一）综述资料 C-反应蛋白（C-reactive protein，CRP）由肝细胞合成，在胎儿期产生，非母体胎盘传递。其产生机理是：当机体受感染或组织受损伤时巨噬细胞和其他白细胞等被激活，产生白细胞介素-6(IL-6)、白细胞介素-1（IL-1）、肿瘤坏死因子TNF-a等细胞因子及其他介导物，这些细胞因子和介导物到达肝脏，刺激肝细胞和上皮细胞合成 CRP。在结构上，CRP含5个多肽链亚单位，非共价地结合为盘形多聚体，分子量为11.5万～14万，CRP是一种典型的急性时相蛋白。
常规CRP测定包括定性、半定量和定量分析，可用于评价感染，组织损伤和炎症性疾病。对于常规的CRP测定，参考值通常被认为是临床上含量高于10毫克/升。在健康人群血液中CRP水平低于5毫克/升，而在各种条件下，急性炎症4～8小时内，CRP值达到约20至500毫克/升。常规CRP作为急性炎症评估指标比红细胞沉降率（ESR）和白细胞计数更敏感、更可靠。
超敏C反应蛋白线性范围低端低于常规CRP，这种较低的范围可扩大使用适应症，C反应蛋白是非特异性的，必须结合临床症状综合评估，不能作为特定的疾病或疾病的风险的确诊依据。
图1 超敏CRP与常规CRP的区别 超敏C反应蛋白常见的用途可作为心血管疾病风险识别的辅助手段。配合传统的急性冠脉综合征临床诊断使用，可作为冠状动脉疾病或急性冠脉综合征复发的预警指示物。
图2超敏CRP的临床意义 表1 各种CRP的区别及性能要求 常规CRP 超敏CRP 用途 感染，组织损伤和炎症性疾病的评价。提供炎症性疾病的诊断，治疗和监控的信息 是区分低水平炎症状态的灵敏指标, 血清hs-CRP 水平与动脉粥样硬化及急性脑梗死(ACI)等心脑血管疾病的发生、严重程度及预后密切相关 参考值范围 参考值范围: 约10mg/ L 健康人群：≤ 5mg / L 急性范围: 20-500 mg/L 参考值范围: 1mg/L 推荐线性范围 ≥ 5mg/L到上限 < 1.0 mg/L 到≤ 10.0mg/L 灵敏度 明确在线性范围低端的性能 确定定量限（功能灵敏度）综述资料主要包括产品预期用途、产品描述、有关生物安全性的说明、研究结果的总结评价以及同类产品上市情况介绍等内容，其中同类产品上市情况介绍部分应着重从方法学、临床应用情况、性能指标等方面写明拟申报产品与目前市场上已获批准的同类产品之间的异同。应符合《体外诊断试剂注册管理办法（试行）》（以下简称《办法》）和《体外诊断试剂注册申报资料基本要求》（国食药监械〔2007〕609号）的相关要求。
（二）产品说明书 说明书承载了产品预期用途、标本采集及处理、实验方法、检测结果解释以及注意事项等重要信息，是指导实验室工作人员正确操作、临床医生针对检验结果给出合理医学解释的重要依据，因此，产品说明书是体外诊断试剂注册申报最重要的文件之一。产品说明书的格式应符合《体外诊断试剂说明书编写指导原则》的要求，境外试剂的中文说明书除格式要求外，其内容应尽量保持与原文说明书的一致性，翻译力求准确且符合中文表达习惯。产品说明书的所有内容均应与申请人提交的注册申报资料中的相关研究结果保持一致，如某些内容引用自参考文献，则应以规范格式对此内容进行标注，并单独列明文献的相关信息。
结合《体外诊断试剂说明书编写指导原则》的要求，下面对C反应蛋白定量检测试剂盒说明书的重点内容进行详细说明，以指导注册申报人员更合理地完成说明书编制。
1.【预期用途】 C反应蛋白定量检测试剂盒用于体外定量检测血清、血浆、全血和/或其他体液中的C反应蛋白浓度，适用的样本类型应结合实际的临床研究情况进行确认。
注1：
CRP值是非特异性的，不能作为特定的疾病或疾病的风险的检测指标，不建议把CRP的具体临床诊断意义列入预期用途。
注2：C反应蛋白包括常规C反应蛋白（CRP）、超敏CRP（hsCRP），具体根据临床试验核定。
2.【主要组成成份】 （1）说明试剂包含主要组分的名称、数量、比例或浓度等信息。
（2）试剂中不包含但对该项检测必须的组分，申请人应列出相关试剂/耗材的名称、货号及其他相关信息。
（3）试剂盒中不包含质控品、校准品或其他耗材，应说明经验证后推荐配合使用的商品化质控品、校准品或其他耗材的制造商、产品名称以及产品货号等详细信息；
如包含校准品和/或质控品，应说明其主要组成成分及其生物学来源，校准品应注明其定值及溯源性，质控品应有合适的检测范围。
3.【储存条件及有效期】 试剂的效期稳定性、开封稳定性、运输稳定性等信息作详细介绍。并对开封后未使用产品允许暴露于空气中的温度、湿度及效期等条件予以明确。
4.【样本要求】 重点明确以下内容：
（1）样本采集：采集时间点是否受临床症状、用药情况等因素的影响，具体采集部位及类型，详述具体的操作方法或列出相关操作指南文件以指导使用者（最好能够给出具体图示），尽量减少由于样本采集或处理不当对实验造成的影响。
（2）样本处理及保存：样本的保存条件及期限（短期、长期）、运输条件等。冷藏/冷冻样本检测前是否须恢复室温，冻融次数限制。
（3）样本的最大可稀释倍数。
5.【适用机型】所有适用的仪器型号，并提供与仪器有关的重要信息以指导用户操作。
6.【检验方法】 详细说明实验操作的各个步骤，包括：
（1）实验条件：实验环境的温度、湿度等注意事项，检验试剂及样本复温等要求。
（2）试剂使用方法（手工/半自动/全自动）、注意事项。
（3）详述待测样品的预处理方法、步骤及注意事项。
（4）明确样本检测加样量及观察时间。
7.【参考值（参考范围）】 应注明常用样本类型的正常参考值（范围），简单介绍设定该参考值（范围）所选健康人群的区域特征，建议注明以下字样“由于地理、人种、性别及年龄等差异，建议各实验室建立自己的参考值（范围）”。
8.【检验结果的解释】 结合质控品对所有可能出现的结果进行合理的解释。本试剂的检测结果仅供临床参考，对患者的临床诊治应结合其症状/体征、病史、其他实验室检查及治疗反应等情况综合考虑。如存在检测灰区，应对灰区结果的处理方式一并详述。明确有可能存在的数值升高因素及数值降低因素，明确说明对何种条件下需要进行重复检测，以及在重复检测时对待测样本可能采取的优化条件等进行详述。9.【检验方法局限性】（1）干扰物质及HOOK效应对检测结果的影响。
（2）操作时必须严格按照操作规程，精心操作才能得到正确结果，对操作程序作任何修改都可能影响结果。
（3）有关假阴性结果的可能性分析。
某些未知成分屏蔽了抗原决定簇使之无法与抗体结合；
C反应蛋白抗原随着样本放置时间的延长和外界温度上升逐渐降解无法被抗体识别；
不合理的样本采集、转运及处理、样本中被测物质浓度过低等均有可能导致假阴性结果。
10.【产品性能指标】 详述以下性能指标：
注1：由于C反应蛋白目前尚无国家参考品，故选用国际约定、行业参考品或企业内部参考品，以后国家参考品若建立，采用国家参考品。
注2：对线性范围、分析灵敏度等的最低要求见表1。
（1）准确度：
a)检测线性范围内几个浓度点的C反应蛋白参考物质（国际约定、行业参考品或企业内部参考品），检测浓度＜3mg/L时，结果误差在±20%内；
检测浓度＞3mg/L时，结果误差应在±15%（建议相对偏差）内。
注1：最低不得低于国家卫生计生部门质控允许范围。
注2：推荐检测范围内高、中、低浓度样本各选一个样本测试，其中低值样本推荐hsCRP 1mg/L左右，CRP 10mg/L左右。
b)回收：将已知浓度的C反应蛋白加入到血液基质或其他体液成份中，其回收率在（85%～115%）范围内。
c）比对：用已上市试剂盒或参考方法进行比对试验，结果应满足相应要求。
（2）线性范围：确立线性范围至少应取5点（包括下限、中限及上限），每次应重复测定三次，计算出直线方程y=a+bx，相关系数r值≥0.990。
（3）分析灵敏度或检测限（空白限）：
a）分析灵敏度：说明试剂的分析灵敏度或不高于某浓度水平，简单介绍确定方法，对功能灵敏度如何研究可一并注明。
b）检出限：用零浓度校准品或样本稀释液作为样本进行检测，重复测定20次，得出20次测量结果，计算其平均值（M）和标准差（SD），得出M+2SD，根据零浓度校准品和相邻校准品之间的浓度结果进行两点回归拟合得出一次方程，将M+2SD的结果代入上述方程中，求出对应的浓度值，即为最低检出限。
（4）重复性：同一批次的检测试剂对检测范围内某个浓度的C反应蛋白样本进行重复检测10次，计算10次测量结果的平均值（M）和标准差（SD），根据公式CV=SD/M×100%得出变异系数，变异系数CV（%）≤15%。
注：推荐检测范围内高、中、低浓度样本各选一个样本测试，其中低值样本推荐hsCRP 1mg/L左右，CRP 10mg/L左右。
（5）批间差：三个批次的检测试剂对检测范围内某个浓度的C反应蛋白样本各重复检测10次，计算30次测量结果的平均值（M）和标准差（SD），根据公式CV=SD/M×100%得出变异系数，变异系数CV（%）值应≤20%。
注：推荐检测范围内高、中、低浓度样本各选一个样本测试，其中低值样本推荐hsCRP 1mg/L左右，CRP 10mg/L左右。
（6）校准品溯源性 申请人应根据GB/T21415-2008提供所用校准品的来源、赋值过程和相应指标、以及不确定度等内容。
（7）质控品性能要求（如有）a)定值质控品测量准确度 应至少给出一种用校准品校准测量程序后测定该定值质控品的试验方法。
b)均一性 通常取同批号的一定数量最小包装单元的校准品、质控品，每包装单元测试1次，按下面的公式计算测试结果的平均值（）和标准差S1；
另用上述校准品、质控品中的1个最小包装单元连续测试相同次数，计算测试结果的平均值（）和标准差S2；
按下列各公式计算瓶间重复性CV%，所有参数的瓶间重复性结果均应符合要求。最小装量不够完成瓶间差检测的可只进行批内精密度检测。
公式 1 公式 2 公式 3 公式 4 当S1 ----平均值； S----标准差； n----测量次数； xi----指定参数第i 次测量值。 （八）生物安全性（如适用）校准品、质控品如含人源性成分，用经过国家批检合格的以下三种体外诊断试剂盒对该试剂盒的校准品、质控分别进行检测：a)人类免疫缺陷病毒抗体诊断试剂盒； b)丙型肝炎病毒抗体诊断试剂盒； c)乙型肝炎病毒表面抗原诊断试剂盒，HIV抗体、HCV抗体和HBsAg应为阴性。 11.【注意事项】应至少包括以下内容： （1）有关人源组分（如有）的警告，如：试剂内质控品或其他可能含有人源物质的组分，虽已经通过了HBs-Ag、HIV1/2-Ab、HCV-Ab等项目的检测，但截至目前，没有任何一项检测可以确保绝对安全，故仍应将这些组分作为潜在传染源对待。 （2）建议实验室的环境要求，如温度、湿度、电磁环境等。 （3）对采集样本的要求，建议使用新鲜血液，不建议使用高脂乳糜样、黄疸、高类风湿因子样本，勿使用溶血样本，明确样本的处理办法。 （4）对所有样本和反应废弃物都视为传染源进行处理。 （5）其他有关C反应蛋白定量检测试剂盒的注意事项。 （三）拟定产品标准及编制说明 拟定产品标准应符合《体外诊断试剂注册管理办法》和《体外诊断试剂注册申报资料基本要求》的相关规定。另外，对于国产试剂，应参考《中国生物制品规程》（2000年版），将拟申报产品的主要原材料、生产工艺及半成品检定、校准品制备溯源过程、质控品的制备赋值过程等内容作为附录附于标准正文后，并在正文的“产品分类”项中引出该附录内容。 作为定量检测试剂盒，C反应蛋白产品的注册检测应主要包括以下性能指标：外观检查、物理检查、准确度、线性范围、分析灵敏度/检出限（空白限）、精密度（批间、重复性）、校准品溯源性、质控品测量准确度及均一性、生物安全性（如适用）等。如果拟申报试剂已有相应的专用国家/行业标准或相应方法学的通用标准要求发布，则企业标准的要求不得低于上述标准要求。 （四）注册检验 根据《体外诊断试剂注册管理办法（试行）》要求，首次申请注册的第二类产品应该在国家食品药品监督管理局认可的、具有相应承检范围的医疗器械检测机构进行注册检测。由于C反应蛋白目前尚无国家标准品，申请人应建立自己的参考品体系并提供相应的内部参考品。 （五）主要原材料研究资料 1．试剂盒所用抗体的制备、筛选、纯化以及鉴定等详细试验资料。如抗体为申请人自制，则应详述抗体的名称及生物学来源，申请人对该抗体技术指标的要求（如外观、纯度、蛋白浓度、效价等），确定该抗体作为主要原材料的依据； 如抗体为申请人外购，则应详述抗体的名称及生物学来源，外购方名称，提交外购方出具的抗体性能指标及检验证书，详述申请人对该抗体技术指标的要求以及申请人确定该抗体作为主要原材料的依据。 2．其他主要原辅料的选择及验证资料，如包被板、反应缓冲液等，申请人应详述每一原辅料技术指标的要求以及确定该原辅料作为主要原辅料的依据。若为外购，应详述每一原辅料的外购方名称并提交外购方出具的每一原辅料性能指标及检验证书。 3．企业内部参考品的原料选择、制备、定值过程及试验资料。 （六）主要生产工艺及反应体系的研究资料 1.主要生产工艺介绍，可以流程图方式表示，并简要说明主要生产工艺的确定依据。 2.产品反应原理介绍。 3.抗体包被/致敏工艺研究：申请人应考虑如包被液量、浓度、时间、温度等指标对产品性能的影响，通过试验确定上述指标的最佳组合。 4.实验体系反应条件确定：申请人因考虑反应时间、反应温度、pH值等条件对产品性能的影响，通过试验确定上述条件的最佳组合。 5.体系中样品加样方式及加样量确定：申请人应考虑样品加样方式、加样量对产品检测结果的影响，通过实验确定最佳的加样方式及加样量。如样本需采取稀释或其他必要的方法进行处理后方可用于最终检测，申请人还应对可用于样本稀释的物质或处理方法进行研究，通过试验确定最终选择的用于样本稀释的物质或处理方法。确定反应所需其他物质用量（标准品、酶标物、底物等）的研究资料。固相载体、显色(发光)系统、酶作用底物等的介绍。 6.不同适用机型的反应条件如果有差异应分别详述。 （七）分析性能评估资料 企业应提交原厂在产品研制阶段对试剂盒进行的所有性能验证的研究资料，包括具体研究方法、实验数据、质控标准、统计分析等详细资料。对于C反应蛋白定量检测试剂盒建议至少选择3批产品对以下分析性能进行研究：分析灵敏度、准确度、特异性、线性范围、精密度（批间、批内）等指标，具体研究方法建议参考相关指导原则。 对于适用多个机型的产品，应提供如产品说明书【适用机型】项中所列的所有型号仪器的性能评估资料。 1.准确度 （1）与企业内部参考品的比对研究 使用已溯源的企业内部定值参考品进行验证，重点观察检测结果的偏差情况。 （2）回收试验 用于评估定量检测方法准确测定加入纯分析物的能力，结果用回收率表示。通常对样本进行2～3次回收试验，取平均值即平均回收率。 回收试验注意事项： ①加入的标准液体积一般应小于样本体积的10%； ②尽量使加入标准液后样本中的被测物浓度接近医学决定水平； ③标准物浓度应该足够高，以得到不同浓度的回收样本； ④注意基质效应，尽量采用与临床待测样本接近的基质。 （3）方法学比对 采用参考方法或国内/国际普遍认为质量较好的已上市同类试剂作为参比方法，与拟申报试剂同时检测一批病人样品，从测定结果间的差异了解拟申报试剂与参比方法间的偏倚。如偏倚很小或在允许的误差范围内，说明两检测系统对病人标本测定结果基本相符，对同一份临床样本的医学解释，拟申报试剂与参比方法相比不会产生差异结果。 在实施方法学比对前，应分别对拟申报试剂和参比试剂进行初步评估，只有在确认两者都分别符合各自相关的质量标准后方可进行比对试验。方法学比对时应注意质量控制、样本类型、浓度分布范围并对结果进行合理的统计学分析。 注：C反应蛋白目前尚无国家参考品，以后国家参考品若建立，优先采用（1）方法； 本产品不建议采用方法(2)衡量准确度。 2.分析灵敏度 分析灵敏度的确定常使用同批号试剂对零浓度校准品（或样品稀释液）进行至少20次重复检测，以空白均值加两倍标准差报告方法的检测限（+2SD）。 3.线性范围 建立试剂线性范围所用的样本基质应尽可能与临床实际检测的样本相似，理想的样本为分析物浓度接近预期测定上限的混合人血清，且应充分考虑多倍稀释对样本基质的影响。建立一种定量测定方法的线性范围时，需在预期测定范围内选择7～11个浓度水平。例如，将预期测定范围加宽至130%，在此范围内选择更多的浓度水平，然后依据实验结果逐渐减少数据点直至表现出线性关系，可发现最宽的线性范围。 4.精密度 测量精密度的评估应至少包括两个浓度水平的样本进行，两个浓度包括医学决策点附近的数据、报告范围上下限附近的浓度值，通常选用该检测指标的正常参考值（范围）附近和异常高值样本。两个浓度都选用高值样品，可能致CV偏小，也不能选用接近最低检出限的样品，可能致CV偏大。对hsCRP，其中一个水平应处于美国心脏协会/美国疾病预防控制中心（AHA/CDC）给出的低风险类的临床节值（1.0mg/L），其CV应≤10%； 中间水平应处于检测范围的中点； 第三个水平应处于检测上限的附近。 5.分析特异性(1)交叉反应：易产生交叉反应的其他抗原、抗体等的验证情况； (2)干扰物质：样本中常见干扰物质对检测结果的影响，如高脂、黄疸、类风湿因子等干扰因子的研究（结果应量化表示，禁用轻度、严重的模糊表述）； (3)药物影响：常见相关治疗药物对检测结果的影响。 6.钩状（Hook）效应（如有）：说明不会产生Hook效应的浓度上限或相关研究，如需稀释，应注明对稀释液的要求、最佳或最大稀释比例。 （八）参考值（参考范围）确定资料 参考值（范围）确定所采用的样本来源、确定方法及详细的试验资料。建议参考CLSI/NCCLS C28-A2。 （九）稳定性研究资料 稳定性研究资料主要涉及两部分内容，申报试剂的稳定性和适用样本的稳定性研究。前者主要包括实时稳定性（有效期）、运输稳定性、开瓶稳定性及冻融次数限制等研究，申请人可根据实际需要选择合理的稳定性研究方案。稳定性研究资料应包括研究方法的确定依据、具体的实施方案、详细的研究数据以及结论。对于实时稳定性研究，应提供至少三批样品在实际储存条件下保存至成品有效期后的研究资料。 试剂稳定性和样本稳定性两部分内容的研究结果均应在说明书【储存条件及有效期】和【样本要求】两项中进行详细说明。 （十）临床试验资料 1.研究方法 选择境内已批准上市、临床普遍认为质量较好的同类产品作为参比试剂，采用拟申报产品（以下称考核试剂）与之进行对比试验研究，证明本品与已上市产品等效或优于已上市产品。建议企业尽量选择方法学相同、线性范围及精密度等性能接近的同类试剂作为参比试剂。 2.临床研究单位的选择 （1）第二类产品申请人应当选定不少于2家（含2家）省级卫生医疗机构开展临床试验。 （2）临床研究单位应有能力提供临床评价所需的各类样本，实验操作人员有足够的时间熟悉检测系统的各环节（仪器、试剂、质控及操作程序等），熟悉评价方案。在整个实验中，考核试剂和参比试剂都应处于有效的质量控制下，定期对仪器进行校准，最大限度保证试验数据的准确性及可重复性。 （3）不同的临床单位应使用同一批考核试剂进行临床试验，以便对数据进行科学客观的统计分析。 3.临床试验方案 临床试验实施前，研究人员应从流行病学、统计学、临床医学、检验医学等多方面考虑，设计科学合理的临床研究方案。各临床研究机构的方案设置应基本一致，且保证在整个临床试验过程中遵循预定的方案实施，不可随意改动。整个试验过程应在临床研究机构的实验室内并由本实验室的技术人员操作完成，申报单位的技术人员除进行必要的技术指导外，不得随意干涉实验进程，尤其是数据收集过程。 试验方案中应确定严格的病例纳入/排除标准，任何已经入选的病例再被排除出临床研究都应记录在案并明确说明原因。在试验操作过程中和判定试验结果时应采用盲法及样本随机分配以保证试验结果的客观性。对于新试剂的动态监测研究，应在方案中明确前后两次浓度变化有临床意义的标准。临床试验中所涉及的样本类型应与产品说明书一致，且每种样本类型例数的选择应符合基本的统计学要求。各研究单位选用的参比试剂及所用机型应一致，以便进行合理的统计学分析。 4.临床病例选择 (1)临床试验样本量的确定：申请人或临床研究者应根据产品临床使用目的，与该改产品相关疾病的临床发生率确定临床研究的样本量。在符合指导原则有关最低样本要求的前提下，还应符合统计学要求。 ①临床研究的总样本数至少为200例。 ②应考虑样本量的分布。样本量的选择应符合统计学及相关指导原则的要求。 ③样本浓度应覆盖考核试剂检测范围，尽可能均匀分布。尽可能使30%样本的测定值处于参考区间以外，但在测量范围内。 另外，建议在临床试验中选择部分含干扰物质的标本进行对比研究，包括高脂、溶血、黄疸的样本、类风湿因子阳性样本，易共存的其他急性炎症时相因子同时升高的患者标本，以从临床角度验证试剂的特异性。 5.统计学分析 对临床试验结果的统计应选择合适的统计方法，如相关分析、线性回归、受试者工作特征（ROC）曲线分析等。对于对比实验的等效性研究，最常用是对考核试剂和参比试剂两组检测结果的相关及线性回归分析，应重点观察相关系数（r值）或判定系数（R2）、回归拟合方程（斜率和y轴截距）等指标。结合临床试验数据的正/偏态分布情况，建议统计学负责人选择合理的统计学方法进行分析，统计分析应可以证明两种方法的检测结果无明显统计学差异。在临床研究方案中应明确统计检验假设，即评价考核试剂与参比试剂是否等效的标准。 6.结果差异样本的验证 在数据收集过程中，对于两种试剂的检测结果有明显差异的样本，应采用临床上普遍认为质量较好的第三种同类试剂进行验证试验，同时结合患者的临床病情对差异原因及可能结果进行分析。 7.临床试验总结报告撰写 根据《体外诊断试剂临床研究技术指导原则》的要求，临床试验报告应该对试验的整体设计及各个关键点给予清晰、完整的阐述，应该对整个临床试验实施过程、结果分析、结论等进行条理分明的描述，并应包括必要的基础数据和统计分析方法。建议在临床总结报告中对以下内容进行详述。 （1）临床试验总体设计及方案描述 ①临床试验的整体管理情况、临床研究单位选择、临床主要研究人员简介等基本情况介绍； ②病例纳入/排除标准、不同年龄段人群的预期选择例数及标准； ③样本类型，样本的收集、处理及保存等； ④统计学方法、统计软件、评价统计结果的标准。 （2）具体的临床试验情况 ①考核试剂和参比试剂的名称、批号、有效期及所用机型等信息； ②对各研究单位的病例数、病种分布情况进行总合，建议以列表或图示方式给出具体例数及百分比； ③质量控制，试验人员培训、仪器日常维护、仪器校准、质控品运行情况，对检测精密度、质控品回收（或测量值）、抽查结果评估； ④具体试验过程，样本检测、数据收集、样本长期保存、结果不一致样本的校验等。 （3）统计学分析 ①数据预处理、差异数据的重新检测或第三方验证以及是否纳入最终数据统计、对异常值或缺失值的处理、研究过程中是否涉及对方案的修改。 ②定量值相关性和一致性分析 用回归分析验证两种试剂结果的相关性，以y=a+bx和R2的形式给出回归分析的拟合方程，其中：y是考核试剂结果，x是参比试剂结果，b是方程斜率，a是y轴截距，R2是判定系数，同时应给出b的95%（或99%）置信区间，定量值结果应无明显统计学差异。 （4）讨论和结论 对总体结果进行总结性描述并简要分析试验结果，对本次临床研究有无特别说明，最后得出临床试验结论。 三、名词解释 1.分析特异性（Analytical Specificity）：测量程序只测量被测量物的能力。分析特异性用于描述检测程序在样本中有其他物质存在时只测量被测量物的能力。通常以一个被评估的潜在干扰物清单来描述，并给出在特定医学相关浓度值水平的分析干扰程度。 注：潜在干扰物包括干扰物和交叉反应物。 2.精密度（Precision）：在规定条件下，相互独立的测试结果之间的一致程度。精密度的程度是用统计学方法得到的测量不精密度的数字形式表示，如标准差（SD）和变异系数（CV）。 四、参考文献 1.《体外诊断试剂注册管理办法（试行）》，（国食药监械〔2007〕229号）。 2.《体外诊断试剂临床研究技术指导原则》，（国食药监械〔2007〕240号）。 3.《体外诊断试剂说明书编写指导原则》，（国食药监械〔2007〕240 号）。 4.冯仁丰，《临床检验质量管理技术基础》，第二版，上海科学技术文献出版社，2007年4月。 5.Review Criteria for Assessment of C-Reactive Protein(CRP), High Sensitivity C-Reactive Protein(hsCRP)and Cardiac C-Reactive Protein(cCRP)Assays，FDA 6.How to Define and Determine Reference Intervals in the Clinical Laboratory”;Approved Guideline, Second Edition 2000, CLSI/NCCLS C28-A2 C反应蛋白定量检测试剂盒 产品注册技术审查指导原则编制说明 一、编写原则（一）本指导原则编写的目的是用于指导和规范C反应蛋白定量检测试剂盒产品注册申报过程中审查人员对注册材料的技术审评。 （二）本指导原则旨在让初次接触该类产品的注册审查人员对产品机理、结构、主要性能、预期用途等各个方面有所了解，同时让技术审查人员在产品注册技术审评时把握基本的尺度，对产品安全性、有效性作出系统评价。 二、编写依据 （一）《医疗器械监督管理条例》（二）《体外诊断试剂注册管理办法（试行）》（国食药监械〔2007〕229号）（三）《体外诊断试剂临床研究技术指导原则》（国食药监械〔2007〕240号）（四）《体外诊断试剂说明书编写指导原则》（国食药监械〔2007〕240号）（五）《中国生物制品规程》（六）国家食品药品监督管理部门发布的其他规范性文件（七）现行的国家标准和行业标准 三、指导原则中部分内容的编写考虑（一）产品的主要技术指标制定主要参考相关国家标准、行业标准GB/T 26124-2011临床化学体外诊断试剂（盒）、YY/T 1183-2010 《酶联免疫吸附法试剂（盒）》。 （二）为了提高本指导原则的通用性，编写中明确本指导原则包含了免疫比浊法、化学发光法、时间分辨法、免疫荧光法等基于抗原抗体反应原理的免疫学方法。由于各种方法可能在国家标准、行业标准的标准性能要求上不一致，如果拟申报试剂已有相应的专用国家/行业标准或相应方法学的通用标准要求发布，则企业标准的要求不得低于上述标准要求。 （三）本指导原则参考了美国食品药品管理局相关要求，但是对心脏CRP部分，考虑到国内已合并至超敏CRP，故本指导原则未保留。同时国内某些公司申请的全程CRP，在临床上没有相应的称谓，也未保留。 四、编写成员 本指导原则的编写成员由广东省医疗器械注册技术审评人员、行政审批人员、广东省医疗器械质量监督检验中心检验人员、临床专家及相关企业技术人员共同组成，以充分利用各方面的信息和资源，综合考虑指导原则中各个方面的内容，尽量保证指导原则正确、全面、实用。 C-反应蛋白检测试剂盒（全量程）试制工作总结 一、概 述 C反应蛋白（C-reactive protein）是一种能与肺炎链球菌C多糖体反应形成复合物的急性时相反应蛋白，半衰期19小时；血清CRP由肝脏合成，白细胞介素1b、6以及肿瘤坏死因子是其合成的最重要的调节因子；CRP的分子量为105 500，由含有五个相同的未糖基化的多肽亚单位组成，每个亚单位含有187个氨基酸，这些亚单位间通过非共价键连结成环状的五聚体，并有一个链间二硫键。 1930年，Tillett和Francis首次在急性大叶性肺炎患者的血清中发现一种能 在Ca2+存在时与肺炎球菌细胞壁中的C－多糖发生特异性沉淀反应的物质。1941年，Avery等测知它是一种蛋白质，故称为C反应蛋白(CRP)。1944年，Jones将其作为临床风湿热诊断标准的次要指标之一。后来，人们在非感染性疾病和感染性疾病患者的急性期血清中都测到了CRP，于是人们认为，CRP是组织损伤的一种非特异性反应。进一步研究发现：病毒或细菌感染、梗塞、免疫复合物沉积等因素都可导致组织损伤。在组织损伤的急性期，肝脏合成的一些血浆蛋白显著增加，这些蛋白质通称为急性时相蛋白，其中CRP是急性时相蛋白中变化最显著的一种。CRP在正常人血清中其含量极微；在组织受到损伤、炎症、感染或肿瘤破坏时CRP可以在数小时内急剧上升，可增高数倍或数百倍，2-3天达峰值，待病情改善时逐渐下降，恢复正常。CRP被广泛应用于临床疾病的早期诊断及鉴别诊断，其升高可见于： 1、组织损伤、感染、肿瘤、心肌梗塞及一系列急慢性炎症性疾病，如风湿性关节炎、全身性血管炎、多肌痛风湿病； 2、术后感染及并发症的指标：手术后病人CRP升高，术后7—10天CRP水平应下降，如CRP不降低或再次升高，提示可能并发感染或血栓栓塞； 3、可作为细菌性感染和病毒性感染的鉴别诊断：大多数细菌性感染会引起患者血清CRP升高，而病毒性感染则多数不升高。 超敏C反应蛋白（High sensitivity C-reactive protein）与CRP并不是两种蛋白，只是从灵敏度上加以区分, 超敏C反应蛋白(Hs-CRP)最低检测限达0.1 mg/l;原先认为CRP是正常的血清却发现同未来发生心血管疾病密切相关,大量研究资料表明,动脉粥样化的血栓去除了是脂肪堆积的过程外也是一个慢性炎症过程,；Hs-CRP轻度升高与冠状动脉事件、中风及周围血管病相关，是一项独立的危险因素； HS-CRP已被证实是由慢性炎症引发心血管疾病的独立危险因素，检测其浓度对心血管疾病的干预及预后起重要作用而被临床重视。流行病学调查也显示,hs-CRP 水平升高者发生急性脑卒中的几率是正常健康人的2 倍, 发生心肌梗死的几率是正常者的3 倍。2003 年欧洲高血压防治指南(ESH/ESC)正式推荐, 高血压患者需检测hs-CRP 水平。 目前国内用于全自动生化仪的免疫透射比浊法试剂CRP出现了两种（普通CRP与超敏CRP），普通CRP有较高的线性但灵敏度不好，超敏CRP有较高的灵敏度但线性较低，这样就出现了一种试剂两种名称，用途也有所区别；近几年来，随着检验技术的发展，开始出现了一种全量程CRP，这种CRP即能满足较高的灵敏度，又能满足较高的线性。 二、国内外研究情况 2.1临床研究 CRP作为一种急性时相反应蛋白，被广泛应用于临床。2.1.1用于细菌和病毒感染的鉴别诊断 当细菌感染引发炎症，在炎症进程开始4～7小时就可开始升高，且升高的幅度与细菌感染的严重程度相一致，病毒感染时CRP不增高，以此鉴别感染的性质，指导临床治疗，减少不必要的抗生素治疗，有效防止抗生素的滥用。这些感染临床上常见于肺炎、支气管炎、咽喉炎、细菌性脑膜炎、伤寒、化脓性关节炎、尿路感染、骨盆炎、阑尾炎等等。在鉴别细菌或病毒感染方面，比白细胞计数及分类计数更准确，特别是老年人，免疫系统反应顺应性下降，可能有感染发生但临床上并无发热、白细胞升高等情况，此时检测CRP有助于检出细菌感染。 2.1.2肿瘤监测 CRP的测定用于肿瘤的治疗和预后：CRP术前上升,术后下降，不受放疗、化疗和皮质激素治疗的影响，有助于临床评估肿瘤的进程。 2.1.3监控病情变化及术后感染，并用于抗生素疗效观察 CRP在血中升高的幅度与感染的程度正相关。有研究表明，术后6小时左右，CRP开始升高，如无并发症应在术后三天下降直至正常，如术后出现感染，则CRP长时间不下降；术前CRP升高者，术后感染率也远高于术前CRP不高者。对于烧伤病人，可检测CRP以警示是否发生败血症，以便及时应对治疗。对疑有败血症的新生儿，在24～48小时内作CRP的动态监测，可作为是否停止抗生素治疗的可靠依据，而血培养的时间则需更长，培养结果出来之前无法排除败血症。对细菌感染作抗生素治疗时，动态检测CRP是必要的，它比临床体征更早作出并发症警报和治疗效果的判定，在粒细胞缺乏症或机体免疫状态抑制时更有临床意义。 2.1.4用于评估急性胰腺炎的严重程度 入院时CRP>110mg/l，可能是出血性胰腺炎（临床灵敏度８８％，特异性９４％）；当CRP>250mg/l时,可提示为广泛性坏死性胰腺炎。2.1.5风湿病 类风湿性关节炎患者CRP与疾病相关性较大，比临床症状出现要早4-6周。2.1.6肺部感染 肺炎在年老人群中较难诊断，通常不大有发热。在许多情况下ＣＲＰ>100mg/l，提示细菌感染，如肺炎或化脓性支气管炎。典型的病毒性肺炎不会超过50mg/l。2.1.7儿科感染性疾病： 在儿童急性淋巴细胞白血病常发性细菌败血症，CRP超过100mg/ L,则视为有细菌感染;儿童CRP细菌性脑膜炎时平均195mg/L，而病毒性脑膜炎则低得多。2.1.8肾脏移植排异 移值后8天CRP下降至正常，如发生排斥反应则血清肌酐、尿氮、CRP皆升高。CRP升高在排斥反应发生之前4天出现。但是，感染也可发生CRP升高，要注意两者鉴别。2.1.9 心血管疾病 随着检验技术的发展,原先认为CRP是正常的血清却发现同未来发生心血管疾病密切相关,大量研究资料表明,动脉粥样化的血栓去除了是脂肪堆积的过程外也是一个慢性炎症过程,；CRP轻度升高与冠状动脉事件、中风及周围血管病相关，是一项独立的危险因素； ① 未来发生心血管疾病发病率和死亡率的预测指标 Hs-CRP是健康人未来发生心血管事件一个有价值的预测指标，许多研究证实Hs-CRP能预测首次心肌梗死和疾病的发作，内科健康研究（PHS）显示，Hs-CRP位于最高四分位数的病人未来发生卒中危险增加2倍，未来发生心肌梗死危险增加3倍，未来发生周围血管疾病的危险增加4倍。这种预测作用长期稳定存在于吸烟和非吸烟者中，且独立于其他危险因素。Hs-CRP是已知CHD病人未来心血管病发病和死亡的预测指标，欧洲ECTA研究组的资料显示，稳定性心绞痛（SAP）和不稳定性心绞痛（UAP）病人Hs-CRP浓度每升高一个标准差，非致命性心肌梗死或心脏性猝死的相对危险增加45%。② 急性冠脉综合症（ACS）的预后指标 Hs-CRP测定对ACS的预后价值，首先是在急性局部缺血和不稳定心绞痛的病人中提出的，重度不稳定型心绞痛（UAP）病人入院时若Hs-CRP≥3mg/l 比Hs-CRP﹤3mg/l 者心绞痛复发、冠状动脉血管置换术、心肌梗死和心血管疾病致死等心血管事件发生率高；出院时测Hs-CRP比入院时测能更好的预测90天的不良后果；检测Hs-CRP有助于鉴别心肌钙蛋白（cTn）阴性而病死率增高的病人,应联合合使用cTn与Hs-CRP来评估ACS危险程度,ACS病人入院时Hs-CRP≥5mg/l 与半年内严重心脏病发病率升高相关,而不管cTn值如何。③ 与TC/HDL-C联合预测冠心病危险 在冠心病的危险性研究评估时, Hs-CRP与血脂指标是独立的变量,将两者同时检测并联合分析,在诸多变量分析过程中,记录诸多冠心病危险因素如肥胖高血压糖尿病冠心病家族史等，各种生化指标中仅Hs-CRP与TC/HDL-C有单独的预测价值,两者联合意义更大。 附件5 甘油三酯测定试剂盒注册技术审查指导原 则 本指导原则旨在指导注册申请人对甘油三酯（Triglyceride，TG）测定试剂盒注册申报资料的准备及撰写，同时也为技术审评部门审评注册申报资料提供参考。 本指导原则是对甘油三酯测定试剂盒的一般要求，申请人应依据产品的具体特性确定其中内容是否适用，若不适用，需具体阐述理由及相应的科学依据，并依据产品的具体特性对注册申报资料的内容进行充实和细化。 本指导原则是供申请人和审查人员使用的指导文件，不涉及注册审批等行政事项，亦不作为法规强制执行，如有能够满足法规要求的其他方法，也可以采用，但应提供详细的研究资料和验证资料。应在遵循相关法规的前提下使用本指导原则。 本指导原则是在现行法规、标准体系及当前认知水平下制定的，随着法规、标准体系的不断完善和科学技术的不断发展，本指导原则相关内容也将适时进行调整。 一、适用范围 甘油三酯测定试剂盒是指利用酶法对人血清、血浆或其他体液中的甘油三酯含量进行体外定量测定的试剂。本指导原则适用于进行产品注册和相关许可事项变更的产品。 脂肪酶分解血清中甘油三酯为甘油和脂肪酸。在ATP存在下，甘油激酶将甘油磷酸化成3-磷酸甘油。后者被磷酸甘油氧化酶氧化生成磷酸二羟丙酮和过氧化氢。过氧化氢与过氧化物酶、4-氨基比林进行显色反应，生成有色苯醌亚胺，在500nm（480nm—550nm）处吸光度值与甘油三酯含量成正比。本文不适用于干化学类测定试剂。 依据《体外诊断试剂注册管理办法》（国家食品药品监督管理总局令第5号）、《食品药品监管总局关于印发体外诊断试剂分类子目录的通知》（食药监械管〔2013〕242号），甘油三酯检测试剂属于酯类检测试剂，管理类别为Ⅱ类，分类代号为6840。 二、注册申报资料要求 （一）综述资料 甘油三酯（Triglyceride，TG）是3分子长链脂肪酸和甘油形成的脂肪分子。甘油三酯是人体内含量最多的脂类，大部分组织均可以利用甘油三酯分解产物供给能量，同时肝脏、脂肪等组织还可以进行甘油三酯的合成，在脂肪组织中贮存。人血清中甘油三酯水平呈明显正偏态分布。病理性升高：原发性见于家族性高甘油三酯血症与家族性混合型高脂（蛋白）血症等。继发性见于糖尿病、糖尿累积病，甲状腺功能衰退、肾病综合征、妊娠、口服避孕药、酗酒等。病理性降低：原发性见于无β-脂蛋白血症和低β-脂蛋白血症。继发性见于继发性脂质代谢异常，如消化道疾病（肝疾患、吸收不良综合征）、内分泌疾患（甲状腺功能亢进症、慢性肾上腺皮质不全）及肝素等药物的应用。综述资料主要包括产品预期用途、产品描述、方法学特征、生物安全性评价、研究结果总结以及同类产品上市情况介绍等内容，应符合《体外诊断试剂注册管理办法》和《关于公布体外诊断试剂注册申报资料要求和批准证明文件格式的公告》（国家食品药品监督管理总局公告2014年第44号）的相关要求。 （二）主要原材料的研究资料（如需提供） 包括主要反应成分、质控品、校准品等的选择、制备、质量标准确定的方法及研究资料；校准品应提供详细的量值溯源资料，包括定值试验资料和溯源性文件等；质控品应提供详细的定值资料。 （三）主要生产工艺和反应体系的研究资料（如需提供）1.主要生产工艺介绍，可用流程图方式表示，并说明主要生产工艺过程的研究资料、每一步生产工艺的确认资料及试验数据。包括：工作液的配制和分装，显色系统的描述和确定依据等。 2.主要反应体系的研究资料，包括：样本采集及处理、样本要求，确定反应温度、时间、缓冲体系比较等条件的确认资料及试验数据，确定样本和试剂盒组分加样量的确认资料及试验数据，校准方法、质控方法等。 （四）分析性能评估资料 申请人应当提交产品研制或成品验证阶段对试剂盒进行的所有性能验证的研究资料，对于每项分析性能的评价都应包括具体的研究项目、实验设计、研究方法、可接受标准、试验数据、统计方法、研究结论等详细资料。性能评估时应将试剂和所选用的校准品、质控品作为一个整体进行评价，评估整个系统的性能是否符合要求。有关分析性能验证的背景信息也应在申报资料中有所体现，包括实验地点、适用仪器、试剂规格和批号、所选用的校准品和质控品、临床样本来源等。 性能评估应至少包括准确度、精密度、线性范围、最低检测限、分析灵敏度、分析特异性、其他影响检测的因素等。 1.准确度 对测量准确度的评价方法依次包括：相对偏差、回收试验、比对试验等方法，甘油三酯项目目前有国家标准品和国际参考物质，建议申请人优先采用相对偏差的方法，申请人也可根据实际情况选择其他合理方法进行研究。 1.1相对偏差 使用国家标准品或国际参考物质作为样本进行测试，重复测定3次，计算平均值与标示值的相对偏差。 或用由参考方法定值的高、低2个浓度的人血清对试剂盒进行测试，每个浓度样品重复测定3次，分别取测试结果均值，计算相对偏差。 1.2回收试验 在人血清样品中加入一定体积标准或校准品溶液或纯品，每个浓度重复测定3次，计算回收率。 回收试验注意事项： 1.2.1加入的标准液体积与血清体积比应不大于1:20或其体积比不会产生基质的变化； 1.2.2加入标准或校准品溶液后样品总浓度应在试剂盒测定线性范围内； 1.2.3标准品或校准品应有溯源性； 1.3比对试验 采用参考方法或国内/国际普遍认为质量较好的已上市同类试剂作为参比方法，与拟申报试剂同时检测一批病人样品（至少40例样本），从测定结果间的差异了解拟申报试剂与参比方法间的偏倚。如偏倚很小或在允许的误差范围内，说明两检测系统对病人标本测定结果基本相符，对同一份临床样本的医学解释，拟申报试剂与参比方法相比不会产生差异结果。 在实施方法学比对前，应分别对拟申报试剂和参比试剂进行初步评估，只有在确认两者都分别符合各自相关的质量标准后方可进行比对试验。方法学比对时应注意质量控制、样本类型、浓度分布范围并对结果进行合理的统计学分析。 2.精密度 测量精密度的评估应至少包括两个浓度水平的样本进行，两个浓度都应在试剂盒的测量范围内且有一定的临床意义，通常选用该检测指标的临界值附近样本和异常高值样本。 3.线性范围 建立试剂线性范围所用的样本基质应尽可能与临床实际检测的样本相似，理想的样本为分析物浓度接近预期测定上限的混合人血清，且应充分考虑多倍稀释对样本基质的影响。 超出线性范围的样本如需稀释后测定，应做相关研究，明确稀释液类型及最大可稀释倍数，研究过程应注意基质效应影响，必要时应提供基质效应研究有关的资料。 4.最低检测限 最低检测限的确定常使用同批号试剂对零浓度校准品（或样品稀释液）进行至少20次重复检测，平均值加2倍SD（≥95%臵信区间）即试剂的最低检测限。 5.分析灵敏度 试剂盒测试给定浓度的被测物时，吸光度差值（ΔA）应符合生产企业给定范围。6.分析特异性 应明确已知干扰因素对测定结果的影响：可采用回收实验对不同浓度的溶血、黄疸对检测结果的影响进行评价，干扰物浓度的分布应覆盖人体生理及病理状态下可能出现的物质浓度。待评价的甘油三酯样本浓度至少应为高、中、低三个水平，选取线性范围内有临床代表性意义的浓度。 药物干扰的研究可根据需要由申请人选择是否进行或选择何种药物及其浓度进行。 7.校准品溯源及质控品赋值（如产品中包含）校准品应提供详细的量值溯源资料，包括定值试验资料和溯源性文件等；质控品应提供详细的定值资料。应参照GB/T 21415—2008《体外诊断医疗器械 生物样品中量的测量 校准品和控制物质赋值的计量学溯源性》的要求，提供企业（工作）校准品及试剂盒配套校准品定值及不确定度计算记录，提供质控品赋值及其靶值范围确定的记录。 8.其他需注意问题 不同适用机型、不同包装规格，应分别提交分析性能评估报告。如注册申请中包含不同的包装规格，需要对不同包装规格之间的差异进行分析或验证。如不同的包装规格产品间存在性能差异，需要提交采用每个包装规格产品进行的上述项目评估的试验资料及总结。如不同包装规格之间不存在性能差异，需要提交包装规格之间不存在性能差异的详细说明，具体说明不同包装规格之间的差别及可能产生的影响。 （五）参考区间确定资料 应明确研究采用的样本来源、详细的试验资料、统计方法等，参考区间可参考文献资料，但应当对至少120例的健康个体进行验证。研究结论应与产品说明书【参考区间】的相应描述保持一致。 （六）稳定性研究资料 稳定性研究资料主要涉及两部分内容，申报试剂的稳定性和适用样本的稳定性研究。 试剂的稳定性包括实时稳定性、运输稳定性、开瓶（待机）稳定性等，申请人应至少提供3个生产批次的实时稳定性、开瓶稳定性和运输稳定性研究资料，包括研究目的、材料和方法、研究结论等。试剂的稳定性研究应注意选取代表性包装规格进行研究（例如：校准品稳定性应选取最易受影响的最小装量）。 适用样本的稳定性主要包括室温保存、冷藏和冷冻条件下的有效期验证，可以在合理温度范围内选择温度点（温度范围），每间隔一定的时间段即对储存样本进行性能的分析验证，从而确认不同类型样本的效期稳定性。适于冷冻保存的样本还应对冻融次数进行评价。 试剂稳定性和样本稳定性两部分内容的研究结果均应在说明书【储存条件及有效期】和【样本要求】两项中进行详细说明。 （七）临床评价资料 临床试验资料应符合《关于发布体外诊断试剂临床试验技术指导原则的通告》（国家食品药品监督管理总局通告2014年第16号）的要求，同时研究资料的形式应符合《关于公布体外诊断试剂注册申报资料要求和批准证明文件格式的公告》（国家食品药品监督管理总局公告2014年第44号）临床研究资料有关的规定。下面仅对临床实验中的基本问题进行阐述。 1.研究方法 选择境内已批准上市的性能不低于试验用体外诊断试剂的同类产品作为参比试剂，采用试验用体外诊断试剂（以下称待评试剂）与之进行对比试验研究，证明本品与已上市产品等效。 2.临床试验机构的选择 应选择至少两家经国家食品药品监督管理总局资质认可的临床试验机构，临床试验机构实验操作人员应有足够的时间熟悉检测系统的各环节（试剂、质控及操作程序等），熟悉评价方案。在整个实验中，待评试剂和参比试剂都应处于有效的质量控制下，最大限度保证试验数据的准确性及可重复性。 3.临床试验方案 临床试验实施前，研究人员应从流行病学、统计学、临床医学、检验医学等多方面考虑，设计科学合理的临床研究方案。建议临床前开展预试验工作，最大限度地控制试验误差。各临床试验机构的方案设臵应保持一致，且保证在整个临床试验过程中遵循预定的方案实施，不可随意改动。整个试验过程应在临床试验机构的实验室内并由本实验室的技术人员操作完成，申报单位的技术人员除进行必要的技术指导外，不得随意干涉实验进程，尤其是数据收集过程。 试验方案中应确定严格的病例纳入/排除标准，任何已经入选的病例再被排除出临床研究都应记录在案并明确说明原因。在试验操作过程中和判定试验结果时应采用盲法以保证试验结果的客观性。各临床试验机构选用的参比试剂应保持一致，以便进行合理的统计学分析。另外，待评试剂的样本类型应不超越参比试剂的样本类型。 临床试验方案必须获得临床试验机构伦理委员会的同意。 4.研究对象选择 临床试验应选择具有特定症状/体征人群作为研究对象。企业在建立病例纳入标准时，应考虑到不同人群的差异，尽量覆盖各类适用人群。在进行结果统计分析时，建议对各类人群分别进行数据统计分析。总体样本数不少于200例，异常值样本数不少于80例。样本中待测物浓度应覆盖待评试剂线性范围，且尽可能均匀分布。 应明确样本存贮条件、可否冻融等要求及避免使用的样本，血浆应明确抗凝剂的要求。实验中，尽可能使用新鲜样本，避免贮存。如无法避免使用贮存样品时，注明贮存条件及时间，在数据分析时应考虑其影响。 如果声称待评试剂同时适用于血清或血浆样本类型，可完成一个样本类型（血清或血浆）不少于200例的临床研究，同时可选至少100例血清或血浆同源样本进行比对研究，异常值样本不少于40例进行临床研究，其中不同浓度样本分布情况与总例数中分布情况应一致。也可以分别对同时适用的多个样本类型按照《体外诊断试剂临床试验技术指导原则》（国家食品药品监督管理总局通告2014年第16号）中试验样本量一般要求规定的200例进行试验，异常值样本数不少于80例。 涉及产品检测条件优化、增加与原样本类型具有可比性的其他样本类型等变更事项，临床试验采用变更后产品与变更前产品或者已上市同类产品进行比对试验，在至少2家（含2家）临床试验机构开展临床试验，总样本数不少于100例，异常值样本数不少于40例。 5.统计学分析 对临床试验结果的统计应选择合适的统计方法，如相关分析、线性回归、绝对偏倚/偏差及相对偏倚/偏差分析等。对于对比实验的等效性研究，最常用是对待评试剂和参比试剂两组检测结果的相关及线性回归分析，应重点观察相关系数（r值）或判定系数（R2）、回归拟合方程（斜率和y轴截距）等指标。结合临床试验数据的正/偏态分布情况，建议统计学负责人选择合理的统计学方法进行分析，统计分析应可以证明两种方法的检测结果无明显统计学差异。在临床研究方案中应明确统计检验假设，即评价待评试剂与参比试剂是否等效的标准。 6.临床试验总结报告撰写 根据《体外诊断试剂临床试验技术指导原则》的要求，临床试验报告应该对试验的整体设计及各个关键点给予清晰、完整的阐述，应该对整个临床试验实施过程、结果分析、结论等进行条理分明的描述，并应包括必要的基础数据和统计分析方法。建议在临床总结报告中对以下内容进行详述。 6.1临床试验总体设计及方案描述 6.1.1临床试验的整体管理情况、临床试验机构选择、临床主要研究人员简介等基本情况介绍。 6.1.2纳入/排除标准、不同人群的预期选择例数及标准。6.1.3样本类型，样本的收集、处理及保存等。6.1.4统计学方法、统计软件、评价统计结果的标准。6.2具体的临床试验情况 6.2.1待评试剂和参比试剂的名称、批号、有效期及所用机型等信息。 6.2.2对各研究单位的病例数、人群分布情况进行总合，建议以列表或图示方式给出具体例数及百分比。 6.2.3质量控制，试验人员培训、仪器日常维护、仪器校准、质控品运行情况，对检测精密度、质控品回收（或测量值）、抽查结果评估。 6.2.4具体试验过程，样本检测、数据收集、样本长期保存等。 6.3统计学分析 6.3.1数据预处理、对异常值或离群值的处理、研究过程中是否涉及对方案的修改。 6.3.2定量值相关性和一致性分析 用回归分析验证两种试剂结果的相关性，以y=a+bx和R2的形式给出回归分析的拟合方程，其中：y是待评试剂结果，x是参比试剂结果，b是方程斜率，a是y轴截距，R2是判定系数（通常要求R2≥0.95）。 6.4讨论和结论 对总体结果进行总结性描述并简要分析试验结果，对本次临床研究有无特别说明，最后得出临床试验结论。 （八）产品风险分析资料 对体外诊断试剂产品寿命周期的各个环节,从预期用途、可能的使用错误、与安全性有关的特征、已知和可预见的危害等方面的判定以及对患者风险的估计进行风险分析、风险评价和相应的风险控制基础上，形成风险管理报告。应当符合相关行业标准的要求。 风险分析应包含但不仅限于以下方面的内容：预期用途错误包括：设计开始时未设定预期分析物、未作适用机型验证、未针对特定的样本类型验证。性能特征失效包括：精密度失效、准确度失效、非特异性、稳定性失效、测量范围失效、定性/定量失效、量值溯源失效、校准失效。不正确的结果包括：配方错误、采购的原料未能达到设计要求的性能、原材料储存条件不正确、使用了过期的原材料、反应体系不正确、试剂与包装材料不相容。可能的使用错误包括：生产者未按照生产流程操作，检验者未按照原料、半成品、成品检验标准操作，装配过程组份、标签、说明书等漏装或误装，成品储存或运输不当，客户未参照产品说明书设臵参数或使用。与安全性有关的特征包括：有毒化学试剂的化学污染、样本的潜在生物污染、不可回收包装或塑料的环境污染。 （九）产品技术要求 申请人应当在原材料质量和生产工艺稳定的前提下，根据申请人产品研制、前期临床评价等结果，依据国家标准、行业标准及有关文献，按照《关于发布医疗器械产品技术要求编写指导原则的通告》（国家食品药品监督管理总局通告2014年第9号）的有关要求，编写产品技术要求，内容主要包含产品性能指标和检验方法。 进口产品的产品技术要求应当包括英文版和中文版，英文版应当由申请人签章，中文版由申请人或其代理人签章。 下面就产品技术要求中涉及的产品适用的相关标准和主要性能指标等相关内容作简要叙述。 1.产品适用的相关标准：（1）GB/T 21415—2008体外诊断医疗器械 生物样品中量的测量 校准品和控制物质赋值的计量学溯源性 （2）GB/T 26124—2011临床化学体外诊断试剂（盒）（3）YY/T 1199—2013甘油三酯测定试剂盒（酶法）2.主要性能指标： 2.1外观 应与申请人声称试剂外观一致。这里可以包括试剂盒包装外观、试剂内包装外观、试剂的外观。 2.2装量 试剂装量应不少于标示装量。2.3试剂空白吸光度 用蒸馏水、去离子水或其他指定溶液作为空白加入工作试剂作为样品测试时，试剂空白吸光度A(申请人指定的波长，37℃，1.0 cm)≤0.2。 2.4分析灵敏度 试剂盒测试给定浓度的被测物时，吸光度差值（ΔA）应符合生产企业给定范围。 2.5线性范围 线性范围应至少达到1.13 mmol/L—9.04 mmol/L。2.5.1相关系数（r） 线性相关系数r应不小于0.990（线性范围下限应不低于产品的最低检测线，不高于参考区间下限）。 2.5.2线性偏差 线性偏差应不超过申请人给定值。线性偏差可分段描述或连续描述，若分段描述，应注意分段点的确定。 2.6精密度 2.6.1重复性 用同一样本或质控品重复测试至少10次，所得结果的精密度（变异系数CV）应≤5.0%。 测定样本应至少包含两个浓度点，一般应按医学决定水平取甘油三酯临界值和异常高值浓度点。 2.6.2批间差 试剂（盒）批间相对极差应≤10.0%。样本选取同前。2.7准确度 2.7.1相对偏差 提供参考物质或用参考方法定值的血清测定，实测值与标示值偏差应在±15.0%范围内。 2.7.2回收试验 在临床样本中加入一定体积标准溶液（标准溶液体积与临床样本体积应不会产生基质的变化，加入标准溶液后样品总浓度必须在试剂（盒）测定线性范围内）或纯品，回收试验一般选取两个或两个以上浓度进行，回收率应在90%—110%之间。 2.7.3比对试验 用待测试剂盒与申请人选定分析系统（已在国内上市）分别检测不少于40个在检测范围内的人源样品，用线性回归方法计算两组结果的相关系数r≥0.990以及每个浓度点的偏差，偏差应不超过申请人给定值。偏差可分段描述或连续描述，若分段描述，应注意分段点的确定。 建议按上述优先顺序，采用上述方法之一测试试剂盒的准确度。 2.8稳定性 检测申请人声称已到期试剂，产品性能应符合试剂空白吸光度、分析灵敏度、线性范围、精密度、准确度要求。冻干品应同时进行复溶稳定性试验，复溶后放臵到有效期末，产品性能应符合试剂空白吸光度、分析灵敏度、线性、测量精密度、准确度要求。 2.9校准品和质控品的性能指标（如产品中包含）应至少包含外观、装量（干粉试剂可不做）、准确性、均一性、稳定性。冻干型校准品和质控品还应检测批内瓶间差和复溶稳定性。 （十）产品注册检验报告 具有相应医疗器械检验资质和承检范围的医疗器械检验机构出具的注册检验报告和产品技术要求预评价意见。甘油三酯项目目前有国家标准品，应当使用国家标准品进行注册检验，并符合相关要求。 （十一）产品说明书 说明书承载了产品预期用途、检验方法、对检验结果的解释以及注意事项等重要信息，是指导实验室工作人员正确操作、临床医生针对检验结果给出合理医学解释的重要依据，因此，产品说明书是体外诊断试剂注册申报最重要的文件之一。 结合《关于发布体外诊断试剂说明书编写指导原则的通告》（国家食品药品监督管理总局通告2014年第17号）的要求，下面对甘油三酯测定试剂盒说明书的重点内容进行详细说明。 1.【产品名称】 根据《体外诊断试剂注册管理办法》中的命名原则，产品名称通常由被测物质的名称、用途、方法或原理三部分组成，方法或原理部分应能体现具体反应原理，建议参考分类目录或行业标准。2.【包装规格】 包装规格应明确单、双或其他多试剂类型；如不同包装规格有与之特定对应的机型，则应同时明确适用机型。如有货号，可增加货号信息。 如:试剂1:1×40 mL,试剂2: 1×20 mL 日立7170生化分析仪 3.【预期用途】应至少包括以下几部分内容： 3.1说明试剂盒用于体外定量检测人血清、血浆或其他体液中甘油三酯的含量。 3.2明确与甘油三酯检测相关的临床适应症背景情况。如：病理性升高：原发性见于家族性高甘油三酯血症与家族性混合型高脂（蛋白）血症等。继发性见于糖尿病、糖尿累积病，甲状腺功能衰退、肾病综合征、妊娠、口服避孕药、酗酒等。病理性降低：原发性见于无β-脂蛋白血症和低β-脂蛋白血症。继发性见于继发性脂质代谢异常，如消化道疾病（肝疾患、吸收不良综合征）、内分泌疾患（甲状腺功能亢进症、慢性肾上腺皮质不全）及肝素等药物的应用。 4.【检验原理】应结合产品主要成分简要说明检验的原理、方法，必要时可采取图示方法表示，检验原理的描述应结合产品主要组成成分、被测物和产物的关系进行描述： 如：用脂蛋白酯酶（LPL）使血清中的甘油三酯（TG）水解成甘油与脂肪酸，将生成的甘油用甘油激酶（GK）及三磷酸腺苷（ATP）磷酸化。以磷酸甘油氧化酶（GPO）氧化3-磷酸甘油（G-3-P），然后以过氧化物酶（POD），4-氨基安替比林（4-AAP）与4-氯酚（三者合称PAP）反应显色，在特定波长处监测吸光度值，可计算甘油三酯含量。 反应式如下： 5.【主要组成成分】应明确以下内容： 试剂盒提供的试剂组分的名称、比例或浓度，各组分是否可以互换；如含有校准品或质控品，除明确组成成份及生物学来源外，还应明确其定值及溯源性，溯源性应写明溯源的最高级别，包括标准物质或参考物的发布单位及编号，质控品应明确靶值范围。 例如： 本试剂盒由试剂1、2和校准品组成： 试剂1：三羟甲基氨基甲烷缓冲液100 mmol/L、三磷酸腺苷（ATP）0.20 mmol/L、甘油激酶（GK）1200 U/L、甘油磷酸氧化酶4000 U/L、氯化镁23 mmol/L、过氧化物酶5 KU/L； 试剂2：三羟甲基氨基甲烷缓冲液100 mmol/L、4-氨基安替比林1.0 mmol/L、脂蛋白脂酶2500 U/L、三磷酸腺苷0.20 mmol/L、3，5-二氯-2-羟基苯磺酸钠2.0 mmol/L； 校准品：为甘油三酯溶液，校准品具有批特异性，每批定值，定值见瓶签标示，量值可溯源至GBW09148或国际参考物质SRM1595。 6.【储存条件及有效期】应明确未开封的试剂实际储存条件及有效期，开封后在生化分析仪上待机稳定期。干粉校准品（如适用）应明确复溶稳定性。 注：保存条件不应有模糊表述，如“室温”、“常温”。7.【适用仪器】应明确可适用的具体品牌、型号的仪器。8.【样本要求】重点明确以下内容：样本类型、处理、保存期限及保存条件（短期、长期），运输条件等。如有血浆样本，应注明对抗凝剂的要求（如果草酸盐、柠檬酸盐、EDTA钠盐等对甘油三酯浓度造成干扰，应明确避免使用的提示）。冷藏/冷冻样本检测前是否须恢复室温，可冻融次数。特殊体液标本还应详细描述对采集条件、保存液、容器要求等可能影响检测结果的要求。应对已知的干扰物进行说明，如：存在的干扰因素，明确黄疸、溶血、药物等干扰物对测定的影响，同时列出干扰物的具体浓度。 9.【检验方法】详细说明试验操作的各个步骤，包括： 9.1试剂配制方法、注意事项。 9.2试验条件：温度、时间、测定主/副波长、试剂用量、样本用量、测定方法、反应类型、反应方向、反应时间等以及试验过程中的注意事项。 9.3校准：校准品的使用方法、注意事项、校准曲线的绘制。 9.4质量控制：质控品的使用方法、对质控结果的必要解释以及推荐的质控周期等；建议在本部分注明以下字样：如果质控结果与预期不符，提示检测结果不可靠，不应出具检测报告。 9.5检验结果的计算：应明确检验结果的计算方法。超出线性范围的样本如进行稀释，应结合可检测范围研究结果明确稀释液类型和最大可稀释比例。 10.【参考区间】应注明常用样本类型的参考区间，并简要说明其确定方法。建议注明“由于地理、人种、性别和年龄等差异，建议各实验室建立自己的参考区间”。 11.【检验结果的解释】说明可能对检验结果产生影响的因素，在何种情况下需要进行确认试验。 12.【检验方法的局限性】说明该检验方法的局限性。 13.【产品性能指标】 至少应详述以下性能指标，性能指标应与产品技术要求中相关技术指标保持一致。 13.1试剂空白吸光度； 13.2分析灵敏度； 13.3准确度； 13.4精密度（重复性和批间差）； 13.5线性范围； 13.6特异性。 14.【注意事项】应至少包括以下内容： 14.1本试剂盒的检测结果仅供临床参考，对患者的临床管理应结合其症状/体征、病史、其他实验室检查及治疗反应等情况综合考虑。 14.2本试剂盒仅供体外诊断用，试剂中含有的化学成分接触人体后是否会产生不良的影响后果。 14.3采用不同方法学的试剂检测所得结果不应直接相互比较，以免造成错误的医学解释；建议实验室在发给临床医生的检测报告注明所用试剂特征。 14.4有关人源组分的警告，如：试剂盒内的质控品、校准品或其他人源组分，虽已经通过了HBs-Ag、HIV1/2-Ab、HCV-Ab等项目的检测，但截至目前，没有任何一项检测可以确保绝对安全，故仍应将这些组份作为潜在传染源对待。 14.5样本：（1）采集时间要求、与用药的先后顺序或用药后时间间隔等；（2）对所有样本和反应废弃物都应视为传染源对待。 14.6其他有关甘油三酯测定的注意事项。 15.【标识的解释】如有图形或符号，请解释其代表的意义。 16.【参考文献】应当注明在编制说明书时所引用的参考文献。 17.【基本信息】 17.1境内体外诊断试剂 17.1.1注册人与生产企业为同一企业的，按以下格式标注基本信息： 注册人/生产企业名称，住所，联系方式，售后服务单位名称，联系方式，生产地址，生产许可证编号 17.1.2委托生产的按照以下格式标注基本信息： 注册人名称，住所，联系方式，售后服务单位名称，联系方式，受托企业的名称，住所，生产地址，生产许可证编号 17.2进口体外诊断试剂 按照以下格式标注基本信息： 注册人/生产企业名称，住所，生产地址，联系方式，售后服务单位名称，联系方式，代理人的名称，住所，联系方式 18.【医疗器械注册证编号/产品技术要求编号】应当写明医疗器械注册证编号/产品技术要求编号。 19.【说明书核准日期及修改日期】应注明该产品说明书的核准日期。如曾进行过说明书的变更申请，还应该同时注明说明书的修改日期。 三、参考文献 （一）《体外诊断试剂注册管理办法》（国家食品药品监督管理总局令第5号） （二）《医疗器械说明书和标签管理规定》（国家食品药品监督管理总局令第6号） （三）《关于发布医疗器械产品技术要求编写指导原则的通告》（国家食品药品监督管理总局通告2014年第9号） （四）《关于发布体外诊断试剂临床试验技术指导原则的那广告》（国家食品药品监督管理总局通告2014年第16号） （五）《关于发布体外诊断试剂说明书编写指导原则的通告》（国家食品药品监督管理总局通告2014年第17号） （六）《关于公布体外诊断试剂注册申报资料要求和批准证明文件格式的公告》（国家食品药品监督管理总局公告2014年第44号） （七）《关于含有牛、羊源性材料医疗器械注册有关事宜的公告》（国食药监械〔2006〕407号） （八）国家食品药品监督管理部门发布的其他规范性文件 （九）GB/T 21415—2008体外诊断医疗器械 生物样品中量的测量 校准品和控制物质赋值的计量学溯源性 （十）GB/T 26124-2011临床化学体外诊断试剂（盒） （十一）YY/T 0316—2008医疗器械 风险管理对医疗器械的应用 （十二）YY/T 1199—2013甘油三酯测定试剂盒（酶法） 甘油三酯测定试剂盒注册技术审查指导原 则编写说明 一、指导原则编写目的 编制本指导原则旨在指导和规范注册申请人对甘油三酯（Triglyceride，TG）测定试剂盒注册申报资料的准备及撰写工作，同时帮助审查人员理解和掌握该类产品原理、组成、性能、预期用途等内容，把握技术审评工作基本要求和尺度，对产品安全性、有效性作出系统评价。 由于甘油三酯测定试剂盒产品仍在不断发展，审查人员仍需从风险分析的角度认真确定申报产品的预期用途与风险管理是否相当；由于我国医疗器械法规框架仍在构建中，审查人员仍需密切关注相关法规、标准及最新进展，关注审评产品实际组成、原理、预期用途等方面的个性特征，以保证产品审评符合现行法规安全、有效的要求。 二、指导原则部分内容说明 （一）指导原则主要根据体外诊断试剂产品注册申报资料的要求，借鉴国家食品药品监督管理部门已发布的相关产品注册技术审查指导原则的体例进行编写，以便于注册技术审评人员理解。 （二）产品应适用相关标准中给出了现行有效的国家标准、行业标准（包括产品标准、基础标准）。 （三）产品的主要性能指标中给出了产品需要考虑的各个方面，主要提出共性要求，具体量化指标需要参照相关的国家标准、行业标准和生产商技术能力予以确定。 （四）关于线性偏差以及准确度偏差说明：考虑到，如技术要求中线性偏差以及准确度（比对试验）偏差均采用相对偏差进行表述，当对线性范围中某一极低值样本进行线性范围以及准确度（比对试验）试验时，其试验结果采用绝对偏差符合申请人的规定更为合理。因此，本指导原则建议企业可对产品线性偏差以及准确度（比对试验）偏差进行分段要求，分别采用绝对偏差和相对偏差进行表述。 （五）关于产品技术要求中分析灵敏度描述的说明：行业标准YY/T 1199—2013中分析灵敏度指的是产品功能灵敏度，而国家标准GB/T 26124—2011中分析灵敏度，指的是产品校准曲线斜率。鉴于甘油三酯测定试剂盒功能灵敏度指标目前并没有实际临床意义，本指导原则中分析灵敏度要求采用国家标准GB/T 26124—2011中校准曲线斜率的描述。 （六）关于参考区间的验证资料中对健康个体至少120例的说明：此例数的规定，结合已发布产品技术审查指导原则，并参考《WS/T 402—2012临床实验室检验项目参考区间的制定》以及《C28-A2 如何确定临床检验的参考区间：批准指南（2000）》。 （七）关于临床试验“总体样本数不少于200例，异常值样本数不少于80例”的说明：参照国家局已发布实施的缺血修饰白蛋白、肌酸激酶、碱性磷酸酶产品注册技术指导原则。 （八）关于综述资料、产品说明书中有关与甘油三酯检测相关的临床适应症背景的说明：临床意义的描述参考自《全国临床检验操作规程（第4版）》。 三、指导原则编写单位和人员 本指导原则编写人员由浙江省医疗器械技术审评人员、行政审批人员、检验和临床专家、产品专业厂家代表等共同组成。 附件3 乳酸脱氢酶测定试剂盒注册技术 审查指导原则 本指导原则旨在指导注册申请人对乳酸脱氢酶测定试剂盒注册申报资料的准备及撰写，同时也为技术审评部门审评注册申报资料提供参考。 本指导原则是对乳酸脱氢酶测定试剂盒的一般要求，申请人应依据产品的具体特性确定其中内容是否适用，若不适用，需具体阐述理由及相应的科学依据，并依据产品的具体特性对注册申报资料的内容进行充实和细化。 本指导原则是供申请人和审查人员使用的指导文件，不涉及注册审批等行政事项，亦不作为法规强制执行，如有能够满足法规要求的其他方法，也可以采用，但应提供详细的研究资料和验证资料。应在遵循相关法规的前提下使用本指导原则。 本指导原则是在现行法规、标准体系及当前认知水平下制定的，随着法规、标准体系的不断完善和科学技术的不断发展，本指导原则相关内容也将适时进行调整。 一、适用范围 乳酸脱氢酶测定试剂盒是指基于分光光度法原理，利用全自动、半自动生化分析仪或分光光度计，对血清、血浆或其他体液中的乳酸脱氢酶活性进行体外定量分析的试剂。 依据《体外诊断试剂注册管理办法》（国家食品药品监督管理总局令第5号）、《食品药品监管总局关于印发体外诊断试剂分类子目录的通知》（食药监械管〔2013〕242号），乳酸脱氢酶测定试剂盒管理类别为Ⅱ类，分类代号为6840。 乳酸脱氢酶活性的测定方法目前主要有乳酸→丙酮酸乳酸底物法（L→P）和丙酮酸 →乳酸丙酮酸底物法（P→L） 1.乳酸→丙酮酸乳酸底物法（L→P） 在碱性条件下，乳酸脱氢酶催化L-乳酸生成丙酮酸，同时将NAD+（氧化型烟酰胺腺嘌呤二核苷酸）还原成NADH（还原型烟酰胺腺嘌呤二核苷酸）。NADH生成的速率与血清中乳酸脱氢酶的活性成正比，340nm波长处监测NADH吸光度上升时变化速率，计算乳酸脱氢酶的活性。（国际临床化学联合会IFCC参考方法） 2.丙酮酸→乳酸丙酮酸底物法（P→L） 中性条件下，乳酸脱氢酶催化丙酮酸生成L-乳酸，同时将NADH（还原型烟酰胺腺嘌呤二核苷酸）氧化成NAD+（氧化型烟酰胺腺嘌呤二核苷酸）。NADH消耗的速率与血清中乳酸脱氢酶的活性成正比，340nm波长处监测NADH吸光度下降时变化速率，计算乳酸脱氢酶的活性。 从方法学考虑，本指导原则主要指乳酸脱氢酶催化丙酮酸和乳酸之间的氧化或还原反应的相互转化的同时，NADH量的下降或上升速率，通过在340nm处吸光度的变化，计算乳酸脱氢酶活性。不包括干化学、酶联免疫类检测试剂及电泳等检测方法。 二、注册申报材料要求 （一）综述资料 综述资料主要包括产品预期用途、产品描述、方法学特征、生物安全性评价、研究结果总结以及同类产品上市情况介绍等内容，应符合《体外诊断试剂注册管理办法》和《关于公布体外诊断试剂注册申报资料要求和批准证明文件格式的公告》（国家食品药品监督管理总局公告2014年第44号）的相关要求。相关描述应至少包含如下内容： 1.产品预期用途及辅助诊断的临床适应症背景情况：（1）乳酸脱氢酶的生物学特征、结构与功能，在体内正常和病理状态下的代谢途径和存在形式。 （2）与预期用途相关的临床适应症背景情况，如临床相关疾病的发生、实验室诊断方法等。 2.产品描述：包括产品所采用的技术原理，主要原材料的来源、质量控制及制备方法，主要生产工艺过程及关键控制点，质控品、校准品的制备方法及溯源情况。 3.有关生物安全性方面的说明：如果体外诊断试剂中的主要原材料，采用各种动物、病原体、人源的组织和体液等生物材料经处理或添加某些物质制备而成，为保证产品在运输、使用过程中对使用者和环境的安全，研究者应提供对上述原材料所采用的灭活等试验方法的说明。 4.有关产品主要研究结果的总结和评价。 5.其他：包括同类产品在国内外批准上市的情况。相关产品所采用的技术方法及临床应用情况，申请注册产品与国内外同类产品的异同等。 （二）主要原材料研究资料（如需提供）应提供主要原材料、校准品（如产品包含）、质控品（如产品包含）的选择、制备、质量标准及验证有关的研究资料，质控品、校准品的定值试验材料，校准品的溯源性文件等。 （三）主要生产工艺和反应体系的研究资料（如需提供）主要工艺包括：配制、分装等描述及确定依据，应包含产品的工艺流程图和关键控制点；反应体系包括样本采集及处理、样本要求、试剂用量、反应条件（温度、时间等）等研究资料。 （四）分析性能评估资料 应至少提供多个批次样品的分析性能评估资料，包括具体的研究方法、试验数据、统计方法、研究结论等。性能评估时应将试剂和所选用的校准品、质控品作为一个整体进行评价，评估整个系统的性能是否符合要求。 性能评估应至少包括准确度、精密度、线性范围、分析特异性（抗干扰能力）、分析灵敏度、其他影响检测的因素等。 1.准确度 对测量准确度的评价依次包括：与国家标准品（和/或国际标准品）的偏差分析、方法学比对等方法，企业可根据实际情况选择合理方法进行研究。 1.1与国家（国际）标准品的比对研究 该研究项目已有相应国家（国际）标准品，优先使用国家（国际）标准品进行验证，重点观察对相应标准品检测结果的偏差情况。 1.2方法学比对 采用参考方法或国内/国际普遍认为质量较好的已上市同类试剂作为参比方法，与拟申报试剂同时检测一批病人样品（至少40例样本），从测定结果间的差异了解拟申报试剂与参比方法间的偏倚。如偏倚很小或在允许的误差范围内，说明两检测系统对病人标本测定结果基本相符，对同一份临床样本的医学解释，拟申报试剂与参比方法相比不会产生差异结果。 在实施方法学比对前，应分别对拟申报试剂和参比试剂进行初步评估，只有在确认两者都分别符合各自相关的质量标准后方可进行比对试验。方法学比对时应注意质量控制、样本类型、浓度分布范围并对结果进行合理的统计学分析。其中，浓度分布应覆盖产品的可报告范围。 2.精密度 测量精密度的评估应至少包括生理和病理两个浓度水平的样本进行。 测量精密度的评价方法并无统一的标准可依，可根据不同的试剂特征或申请人的研究习惯进行，建议参考CLSI EP15-A。 3.线性范围 建立试剂线性范围所用的样本基质应尽可能与临床实际检测的样本相似，理想的样本为分析物浓度接近预期测定上限的混合人血清，且应充分考虑多倍稀释对样本基质的影响。 超出线性范围的样本如需稀释后测定，应作相关研究，明确稀释液类型及最大可稀释倍数，研究过程应注意基质效应影响，必要时应提供基质效应研究有关的资料。 4.分析特异性 应明确已知干扰因素对测定结果的影响：可采用回收实验对不同浓度的溶血、黄疸、脂血对检测结果的影响进行评价，干扰物浓度的分布应覆盖人体生理及病理状态下可能出现的物质浓度，明确干扰物质影响的最大浓度。药物干扰的研究可根据需要由申请人选择是否进行或选择何种药物及其浓度进行。 5.分析灵敏度 用已知活性的样品进行测试，记录在试剂（盒）规定参数下产生的吸光度改变。换算为n单位吸光度差值（ΔA）或吸光度变化（ΔA/min）即为本产品的分析灵敏度。 6.其他需注意问题 6.1不同适用机型的反应条件如果有差异应分别评估，不同样本类型应分别进行分析性能评估。 分析性能评估报告应明确所用仪器设备型号、试剂、校准品、质控品等的产品名称、生产企业名称、产品批号、注册证等信息。 6.2校准品溯源及质控品赋值 应参照GB/T 21415—2008《体外诊断医疗器械 生物样品中量的测量 校准品和控制物质赋值的计量学溯源性》的要求，提供企业（工作）校准品及试剂盒配套校准品定值及不确定度的研究资料，提供质控品赋值及其靶值范围确定的研究资料。 （五）参考区间确定资料 提供参考区间确定所采用的样本来源、确定方法及详细的试验资料, 建议参考CLSI/NCCLS C28-A2。研究结论应与产品说明书【参考区间】的相应描述保持一致。 （六）稳定性研究资料 稳定性研究资料主要涉及两部分内容，申报试剂的稳定性和适用样本的稳定性研究。这里主要指试剂的稳定性，通常包括保存期稳定性（有效期）、开瓶稳定性、复溶稳定性等（各3个批次）。申请人应至少提供保存期稳定性和开瓶稳定性、干粉试剂同时应提供复溶稳定性研究资料。稳定性研究资料应包括研究方法的确定依据、具体的实施方案、详细的研究数据以及结论，应涵盖产品中受稳定性影响的性能指标（如准确度、线性范围等）。 保存期稳定性研究，应提供至少3批样品在实际储存条件下保存至成品有效期后的研究资料。 试剂稳定性和样本稳定性两部分内容的研究结果均应在说明书【储存条件及有效期】和【样本要求】两项中进行详细说明。 （七）临床评价资料 临床研究资料应符合《关于发布体外诊断试剂临床试验技术指导原则的通告》（国家食品药品监督管理总局通告2014年第16号）的要求，同时研究资料的形式应符合《体外诊断试剂注册申报资料要求和批准证明文件格式》中临床研究资料有关的规定。临床实验中的基本要求： 1.研究方法 选择境内已批准上市的性能不低于试验用体外诊断试剂的同类产品作为参比试剂，采用试验用体外诊断试剂（以下称待评试剂）与之进行对比试验研究，证明本品与已上市产品等效。2.临床试验机构的选择 应选择至少两家获得国家食品药品监督管理总局资质认可的临床试验机构，临床试验机构实验操作人员应有足够的时间熟悉检测系统的各环节（试剂、质控及操作程序等），熟悉评价方案。在整个实验中，待评试剂和参比试剂都应处于有效的质量控制下，最大限度保证试验数据的准确性及可重复性。 3.临床试验方案 临床试验实施前，研究人员应从流行病学、统计学、临床医学、检验医学等多方面考虑，设计科学合理的临床研究方案。各临床研究机构的方案设臵应保持一致，且保证在整个临床试验过程中遵循预定的方案实施，不可随意改动。整个试验过程应在临床研究机构的实验室内并由本实验室的技术人员操作完成，申报单位的技术人员除进行必要的技术指导外，不得随意干涉实验进程，尤其是数据收集过程。 试验方案中应确定严格的病例纳入/排除标准，任何已经入选的病例再被排除出临床研究都应记录在案并明确说明原因。在试验操作过程中和判定试验结果时应采用盲法以保证试验结果的客观性。各研究单位选用的参比试剂及所用机型应保持一致，以便进行合理的统计学分析。另外，待评试剂的样本类型应与产品说明书一致，且不应超越参比试剂对样本类型的检测要求，如果选择了参比试剂适用样本类型以外的样本，则应采用其他合理方法对额外的样本类型进行验证。 开展体外诊断试剂临床试验，申请人应当按照试验用体外诊断试剂的类别、风险、预期用途等特性，组织制定科学、合理的临床试验方案。一般应当包括以下内容： （1）一般信息（包括产品信息、临床试验开展的时间和人员等相关信息、申请人相关信息等）； （2）临床试验的背景资料；（3）试验目的；（4）试验设计；（5）评价方法；（6）统计方法； （7）对临床试验方案修正的规定； （8）临床试验涉及的伦理问题和说明、《知情同意书》文本（如有）； （9）数据处理与记录保存;（10）其他需要说明的内容。4.研究对象选择 临床试验应选择具有特定症状/体征人群作为研究对象。企业在建立病例纳入标准时，应考虑到不同人群的差异，尽量覆盖各类适用人群。在进行结果统计分析时，建议对各类人群分别进行数据统计分析。总体样本数不少于200例，异常值样本数不少于60例。 血浆应明确抗凝剂的要求、存贮条件、可否冻融等要求及避免使用的样本。实验中，尽可能使用新鲜样本，避免贮存。 样本中待测物浓度应覆盖待评试剂线性范围，且尽可能均匀分布。 申报的样本类型均应在临床试验中进行验证。如果声称同时适用于血清和血浆样本，可完成一个样本类型（血清或血浆）不少于200例的临床研究，同时可选至少100例血清或血浆同源样本进行比对研究（采用考核试剂评价），其中不同浓度样本分布情况与总例数中分布情况应一致。 如产品发生涉及检测条件优化、增加与原样本类型具有可比性的其他样本类型等变更事项，临床样本总数至少为100例，并在至少两家临床试验机构开展临床试验；变更参考区间及增加临床适应症等变更事项，应根据产品具体变更情况，酌情增加临床试验总样本数。 5.统计学分析 对临床试验结果的统计应选择合适的统计方法，如相关分析、线性回归、绝对偏倚/偏差及相对偏倚/偏差分析等。对于对比实验的等效性研究，最常用是对待评试剂和参比试剂两组检测结果的相关及线性回归分析，应重点观察相关系数（r值）或判定系数（R2）、回归拟合方程（斜率和y轴截距）等指标。结合临床试验数据的正/偏态分布情况，建议统计学负责人选择合理的统计学方法进行分析，统计分析应可以证明两种方法的检测结果无明显统计学差异。在临床研究方案中应明确统计检验假设，即评价待评试剂与参比试剂是否等效的标准。 6.结果差异样本的验证 对于比较研究试验中测定结果不符的样本，应采用―金标准‖或其他合理的方法进行复核，以便对临床试验结果进行分析。如无需复核，应详细说明理由。 7.临床试验总结报告撰写 根据《体外诊断试剂临床试验技术指导原则》的要求，临床试验报告应该对试验的整体设计及各个关键点给予清晰、完整的阐述，应该对整个临床试验实施过程、结果分析、结论等进行条理分明的描述，并应包括必要的基础数据和统计分析方法。申请人或临床试验牵头单位应对各临床试验机构的报告进行汇总，并完成临床试验总结报告。临床试验报告的格式及内容如下： 7.1首篇 首篇是每份临床试验报告的第一部分，所有临床试验报告均应包含该部分内容。 7.1.1封面标题 包括试验用体外诊断试剂的通用名称、试验开始日期、试验完成日期、主要研究者（签名）、临床试验机构（盖章）、统计学负责人签名及单位盖章、申请人（盖章）、申请人的联系人及联系方式、报告日期、原始资料保存地点。 7.1.2目录 列出整个临床试验报告的内容目录和对应页码。7.1.3研究摘要 对临床试验情况进行简单的介绍。7.1.4试验研究人员 列出临床试验主要研究人员的姓名、单位、在研究中的职责及其简历（列于附件中），主要研究人员包括主要研究者及各单位的主要参加人员、统计学负责人、临床试验报告的撰写人。 7.1.5缩略语 临床试验报告中所用的缩略语的全称。7.2正文内容和报告格式 7.2.1基本内容 引言：介绍与临床试验产品有关的背景情况，包括（1）被测物的来源、生物及理化性质；（2）临床预期使用目的，所针对的目标适应症人群，目前针对该适应症所采用的临床或实验室诊断方法等；（3）所采用的方法、原理、技术要求等；（4）国内外已批准上市产品的应用现状等。说明申请人和临床试验机构间的合作关系。 7.2.2研究目的。 说明本临床试验所要达到的目的。7.2.3试验管理。 对试验管理结构的描述：管理结构包括主要研究者、主要参加人员、实验室质量控制情况、统计/数据管理情况以及试验中发生的问题及其处理措施等。 7.2.4试验设计。 7.2.4.1试验总体设计及方案的描述。 试验的总体设计和方案的描述应清晰、简洁，必要时采用图表等直观的方式。试验进行时方案修改的情况和任何方案以外的信息来源也应详细叙述。应包括： 7.2.4.1.1临床试验的整体管理情况、临床试验机构选择、临床主要研究人员简介等基本情况介绍； 7.2.4.1.2病例纳入/排除标准、不同年龄段人群的预期选择例数及标准； 7.2.4.1.3样本类型，样本的收集、处理及保存等； 7.2.4.1.4统计学方法、统计软件、评价统计结果的标准 7.2.4.2试验设计及试验方法选择。试验设计中应包括以下内容： 7.2.4.2.1样本量及样本量确定的依据； 7.2.4.2.2样本选择依据、入选标准、排除标准和剔除标准； 7.2.4.2.3样本采集、保存、运输方法等； 7.2.4.2.4对比试剂的确立； 7.2.4.2.5临床试验用所有产品的名称、规格、来源、批号、效期及保存条件，对比试剂的注册情况。考核试剂和参比试剂的名称、批号、有效期及所用机型等信息； 7.2.4.2.6质量控制方法：对质量控制方法进行简要的阐述。试验人员培训、仪器日常维护、仪器校准、质控品运行情况，对检测精密度、质控品回收（或测量值）、抽查结果评估； 7.2.4.2.7临床试验数据的统计分析方法：对各研究单位的病例数、病种分布情况进行总合，建议以列表或图示方式给出具体例数及百分比。 7.2.4.2.7.1数据预处理、差异数据的重新检测或第三方验证以及是否纳入最终数据统计、对异常值或缺失值的处理、研究过程中是否涉及对方案的修改。 7.2.4.2.7.2定量值相关性和一致性分析 用回归分析验证两种试剂结果的相关性，以y=a+bx和R2的形式给出回归分析的拟合方程，其中：y是考核试剂结果，x是参比试剂结果，b是方程斜率，a是y轴截距，R2是判定系数，同时应给出b的95%（或99%）臵信区间，定量值结果应无明显统计学差异。 7.2.4.2.8具体试验过程，样本检测、数据收集、样本长期保存、结果不一致样本的校验等。 7.2.4.2.9试验过程中方案的修改。一般情况下，临床试验方案不宜更改。试验过程中对方案的任何修改均应说明，对更改的时间、理由、更改过程及有无备案进行详细阐述并论证其对整个研究结果评价的影响。 7.2.5临床试验结果及分析。 7.2.6讨论和结论。对总体结果进行总结性描述并简要分析试验结果，对本次临床研究有无特别说明，最后得出临床试验结论。 7.3有关临床试验中特别情况的说明 7.4附件 7.4.1临床试验中所采用的其他试验方法或其他诊断试剂产品的基本信息，如试验方法、诊断试剂产品来源、产品说明书及注册批准情况。 7.4.2临床试验中的所有试验数据，需由临床试验操作者、复核者签字，临床试验机构盖章（封面盖章和骑缝章）。 7.4.3主要参考文献。7.4.4主要研究者简历。 7.4.5申请人需要说明的其他情况等。 （八）产品风险分析研究资料 申请人应考虑产品寿命周期的各个环节，从预期用途、可能的使用错误、与安全性有关的特征、已知及可预见的危害等方面的判定以及对患者风险的估计进行风险分析，应符合YY/T 0316—2008/ISO 14971：2007《医疗器械风险管理对医疗器械的应用》的要求。 （九）产品技术要求 产品技术要求应符合《体外诊断试剂注册管理办法》、《体外诊断试剂注册申报资料要求和批准证明文件格式》和《关于发布医疗器械产品技术要求编写指导原则的通告》（国家食品药品监督管理总局通告2014年第9号）的相关规定。 该产品技术要求中涉及的产品适用的引用文件和主要性能指标等相关内容： 产品适用的相关文件： （1）GB/T 21415—2008 体外诊断医疗器械 生物样品中量的测量 校准品和控制物质赋值的计量学溯源性 （2）GB/T 191—2008 包装储运图示标志 （3）GB/T 26124—2011 临床化学体外诊断试剂（盒）（4）YY/T 0316—2008 医疗器械 风险管理对医疗器械的应用 （5）YY/T 0638—2008 体外诊断医疗器械 生物样品中量的测量 校准品和控制物质物中酶催化浓度赋值的计量学溯源性 （6）YY/T 0466.1—2009 医疗器械 用于医疗器械标签、标记和提供信息的符号 第1部分：通用要求 （7）YY/T 1241—2014 乳酸脱氢酶测定试剂(盒)2.主要性能指标： 2.1外观 应与技术要求中表明的试剂外观一致。这里应当包括试剂（盒）包装外观、试剂内包装外观、试剂的外观。 2.2装量 试剂装量应不少于标示装量或规定限。2.3试剂空白 2.3.1试剂空白吸光度 在37℃、340nm、1cm光径条件下试剂空白吸光度应不大于0.50。 2.3.2试剂空白吸光度变化率 在37℃、340nm、1cm光径条件下，用生理盐水作为样品加入试剂测试时，试剂空白吸光度变化率(ΔA/min)应不大于0.002。 用生理盐水测试试剂（盒），在37℃、340nm、1cm光径条件下，记录测试启动时的吸光度（A1）和约5min(t)后的吸光度（A2），A2测试结果即为试剂空白吸光度测试值，计算出吸光度变化值（｜A2-A1｜/t）(t为测量时间间隔)即为试剂空白吸光度变化率(ΔA/min)。 2.4分析灵敏度 用已知活性的样本测试试剂（盒），记录在试剂（盒）在37℃、340nm、1cm光径条件下的吸光度变化率。按照生产企业规定的分析灵敏度计算公式计算分析灵敏度，应符合生产企业声称的要求。 2.5线性区间 测试血清样本，试剂线性在25U/L—750U/L(37℃)区间内； 2.5.1线性相关系数（r）应不小于0.990； 2.5.2 25U/L—100U/L区间内，线性绝对偏差应不超过±10U/L；101U/L—750U/L区间内，线性相对偏差应不超过10%。 用接近线性区间下限的低活性样品稀释接近线性区间上限的高活性样品，混合成至少5个有效稀释浓度（xi），分别测试试剂（盒），每个稀释浓度测试3次，分别求出测定结果的均值（yi）。以稀释浓度（xi）为自变量，以测定结果均值（yi）为因变量求出线性回归方程。按公式（1）计算线性回归的相关系数（r）。 r [(x-x)(yy)](x-x)(y-y)ii2ii……………………（1） 2稀释浓度（xi）代入线性回归方程，计算yi的估计值及yi与估计值的相对偏差或绝对偏差。 2.6精密度 2.6.1重复性 在重复性条件下，用（200±20）U/L的血清样本或质控样品，重复测试至少20次，分别计算测量值的平均值（x）和标准差（SD）。计算变异系数（CV）应不大于5%。 2.6.2批内瓶间差（适用于干粉或冻干试剂） 用(200±20)U/L的血清样本或质控样品分别测试同一批号的10个待检试剂（盒），并计算10个测量值的平均值（x1）和标准差（SD1）。 用(200±20)U/L的血清样本或质控样品对该批号的1个待检试剂（盒）重复测试10次，计算结果的均值（x2）和标准差（SD2）。按式（2）、式（3）计算瓶间差的变异系数（CV），批内瓶间差均应不大于5%。 当s1＜s2时，令CV=0 2.6.3批间差 用(200±20)U/L的血清样本或质控样品分别测试3个不同批号的试剂（盒），每个批号测试3次，分别计算每批3次测定的均值xi(i=1,2,3)，按公式（4）、（5）计算相对极差（R）。 式中： xmax——xi中的最大值； xmin——xi中的最小值。 试剂（盒）批间相对极差应不大于10%。2.7准确度 可选用以下方法进行验证；优先采用相对偏差的方法。2.7.1相对偏差：相对偏差应不超过±10%。 用可用于评价常规方法的有证参考物质（CRM）对试剂（盒）进行测试，重复检测3次，取测试结果均值（M）按式（6）计算相对偏差（B）。 或用由IFCC乳酸脱氢酶参考测量程序定值的参考范围上限和上限2—5倍浓度水平各一个人源样品（可适当添加被测物，以获得高浓度的样品）对试剂（盒）进行测试，每个浓度样品重复检测3次，分别取测试结果均值按式（6）计算相对偏差（B）。 BMTT100% ………………………（6） 式中： B–相对偏差； M–测试结果均值； T–有证参考物质标示值，或各浓度人源样本定值。2.7.2比对试验：相关系数r2≥0.95,相对偏差应不超过±10%。 参照CLSL EP9-A2的方法，用不少于40个在检测范围内不同浓度的人源样品，用生产企业指定的分析系统作为比对方法，每份样品按待测试剂（盒）操作方法及比对方法分别测试。用线性回归方法计算两组结果的相关系数及每个浓度点的相对偏差。 2.8稳定性 可选用以下方法之一进行验证： 2.8.1效期稳定性：生产企业应规定产品的有效期。取到有效期后的样品检测，线性区间、准确度应符合技术要求。 2.8.2热稳定性试验：检测线性区间、准确度应符合技术要求。 注1：热稳定性试验不能用于推导产品有效期，除非是采用基于大量的稳定性研究数据建立的推导公式。 注2：根据产品特性可选择a)、b)方法的任意组合，但所选用的方法宜能验证产品的稳定性，以保证在有效期内产品的性能符合技术要求。冻干品应同时进行复溶稳定性试验，复溶后放臵到有效期末，产品性能应符合线性区间、准确度的技术要求。 2.9校准品和质控品的性能指标（如产品中包含）应至少包含外观、装量、准确度、均一性、稳定性。冻干型校准品和质控品还应检测批内瓶间差和复溶稳定性。 （十）产品注册检验报告 首次申请注册的乳酸脱氢酶测定试剂盒，应该在具有相应医疗器械检验资质和承检范围的医疗器械检测机构进行注册检验。出具注册检验报告和产品技术要求预评价意见。 (十一)产品说明书 说明书承载了产品预期用途、试验方法、检测结果解释以及注意事项等重要信息，是指导使用人员正确操作、临床医生准确理解和合理应用试验结果的重要技术性文件。产品说明书的格式应符合《关于发布体外诊断试剂说明书编写指导原则的通告》（国家食品药品监督管理总局通告2014第17号）的要求。下面对乳酸脱氢酶测定试剂说明书的重点内容进行详细说明。 1.【产品名称】 通用名称应当按照《体外诊断试剂注册管理办法》规定的命名原则进行命名，可适当参考相关―分类目录‖和/或国家标准及行业标准。 （1）试剂（盒）名称：乳酸脱氢酶测定试剂盒（乳酸底物法）或（丙酮酸底物法） （2）英文名称：例如：L-Lactate dehydrogenase test reagent（kit） 2.【包装规格】 注明可测试的样本数或装量，如××测试/盒、××人份/盒、××mL，除国际通用计量单位外，其余内容均应采用中文进行表述。如产品有不同组分,可以写明组分名称。如有货号，可增加货号信息。 （1）包装规格应明确单、双试剂类型；（2）不得多于技术要求中所列的包装规格； （3）如不同包装规格有与之特定对应的机型，应同时明确适用机型。 3.【预期用途】 应至少包括以下几部分内容： （1）乳酸脱氢酶测定试剂盒用于体外定量检测血清、血浆和/或其他体液中乳酸脱氢酶的活性； （2）应明确与目的检测物相关的临床适应症背景情况。乳酸脱氢酶异常情况常见于哪些疾病，其升高或降低可能有哪些医学解释。 作为支持性资料，申请人应提供由教科书、临床专著、核心期刊文献或英文SCI文献等有关临床适应症背景的资料。 4.【检验原理】 应结合产品主要成分简要说明检验的原理、方法，必要时可采取图示方法表示。 如：在碱性条件下，乳酸脱氢酶催化L-乳酸生成丙酮酸，同时将NAD+ 还原为NADH，因此在37℃、340nm波长下监测吸光度上升速率，可得出乳酸脱氢酶的活性。 反应式如下： 丙酮酸+NADH+H+ L-乳酸+NAD+LDH5.【主要组成成分】 应明确以下内容： 试剂盒提供的试剂组分的名称、数量、每个组成成分在反应体系中的比例或浓度。 如检测中需使用校准品或质控品，应明确说明，并提供校准品溯源性，溯源性应写明溯源的最高级别，包括标准物质或参考物的发布单位及编号，质控品应明确靶值范围等。 例如： 本试剂盒由试剂 1、试剂2和校准品（选配）组成： 试剂1：Tris缓冲液，80mmol/L（pH9.0±0.1）；L-乳酸，70mmol/L。 试剂2：烟酰胺腺嘌呤二核苷酸（NAD+），5.0mmol/L。试剂盒如果配备校准品，需注明校准品定值信息及溯源性（量值最终溯源至国际参考物质ERM-AD453/IFCC）。试剂盒如果配备质控品，需注明质控品靶值范围。 6.【储存条件及有效期】 （1）应明确未开封的试剂实际储存条件及有效期，开瓶稳定期。干粉试剂应明确复溶稳定期。 （2）说明产品的储存条件，如：2—8℃、避免／禁止冷冻或-18℃以下等。其他影响稳定性的条件，如：光线、湿度等也必须说明。 （3）如试剂盒各组分的稳定性不一致，则应对各组分的储存条件和有效期分别进行描述。 7.【适用仪器】 说明可适用的仪器及型号，并提供与仪器有关的信息以便用户能够正确选择使用。 8.【样本要求】 重点明确以下内容： 样本类型、为保证样本各组分稳定所必需的抗凝剂或保护剂等、保存期限及保存条件（短期、长期），能够保证样本稳定的储存、处理和运输方法、已知的干扰物等。如有血浆样本，应注明对抗凝剂的要求（如草酸盐既可与丙酮酸或乳酸发生竞争性抑制，又能与LDH及NADH或NAD+形成复合物。从而抑制催化的还原或氧化反应。应明确避免使用的提示）。特殊体液标本还应详细描述对采集条件、保存液、容器等可能影响检测结果的要求。 中度及重度溶血时，因红细胞内的乳酸脱氢酶浓度很高（约为血浆中360倍），避免使用此类样本。 9.【检验方法】 详细说明试验操作的各个步骤，包括：（1）试剂配制方法、注意事项。 （2）试验条件：温度、时间、测定主/副波长、试剂用量、样本用量、测定方法、反应类型、反应方向、反应时间等以及试验过程中的注意事项。 （3）校准程序（如果需要）：校准品的使用方法、注意事项、校准曲线的绘制。 （4）质量控制程序：质控品的使用方法、对质控结果的必要解释以及推荐的质控周期等。 （5）检验结果的计算：应明确检验结果的计算方法。包括对每个系数及对每个计算步骤的解释。如果可能，应举例说明。如果超出线性范围，样本需要稀释测定时，应根据试剂特性说明稀释液的种类及最大稀释倍数。 10.【参考区间】 应注明常用样本类型及反应方式的参考区间，并说明参考区间确定方法。注明―由于地理、人种、性别和年龄等差异，建议各实验室建立自己的参考值（范围）‖。 11.【检验结果的解释】 说明可能对检验结果产生影响的因素。说明在何种情况下需要进行确认试验。 12.【检验方法的局限性】 说明该检验方法的局限性，如：存在的干扰因素，明确黄疸、溶血、脂浊及药物等内、外源性干扰物对测定的影响，同时列出干扰物的具体浓度。 13.【产品性能指标】 至少应详述以下性能指标，性能指标应不低于标准有关技术指标的要求。 （1）试剂空白吸光度及试剂空白吸光度变化率；（2）分析灵敏度；（3）准确度； （4）精密度（重复性和批间差）； （5）线性区间（线性相关系数和线性偏差）；（6）特异性。14.【注意事项】 应至少包括以下内容： （1）本试剂盒仅供体外检测使用，试剂中含有的化学成分应说明接触人体后产生不良的影响后果。（2）采用不同方法学的试剂检测所得结果不应直接相互比较，以免造成错误的医学解释；建议实验室在发给临床医生的检测报告注明所用试剂特征。 （3）有关人源组分的警告，如：试剂盒内的质控品、校准品或其他人源组分，虽已经通过了HBs-Ag、HIV1/2-Ab、HCV-Ab等项目的检测，但截至目前，没有任何一项检测可以确保绝对安全，故仍应将这些组分作为潜在传染源对待。 （4）样本：对所有样本和反应废弃物都应视为传染源对待。 （5）其他有关乳酸脱氢酶测定的注意事项。15.【标识的解释】 如有图形或符号，请解释其代表的意义。16.【参考文献】 应当注明在编制说明书时所引用的参考文献。17.【基本信息】 符合《体外诊断试剂说明书编写指导原则》对基本信息的要求。 18.【医疗器械注册证编号/产品技术要求编号】 产品的注册证编号/产品技术要求编号 19.【说明书核准日期及修改日期】 注明该产品说明书的核准日期。如曾进行过说明书的变更申请，还应该同时注明说明书的修改日期。 三、审查关注点 （一）关注产品预期用途有关的描述是否与临床研究结论一致。临床研究用参比试剂和第三方确认试剂的预期用途应与申请产品预期用途一致。申报样本类型应在临床研究中进行验证。 （二）审查产品技术要求时应注意产品应不低于YY/T 1241—2014《乳酸脱氢酶测定试剂（盒）》的有关规定。 （三）说明书中预期用途（样本类型）、储存条件及有效期、检验方法、参考区间、产品性能指标等描述应分别与临床研究资料、稳定性研究资料、主要生产工艺和反应体系研究资料、参考区间研究资料、分析性能评估资料的研究结论相一致。 （四）干粉试剂应提供复溶稳定性研究资料并在说明书储存条件及有效期中说明。 四、名词解释 （一）准确度（Accuracy）：一个测量值与可接受的参考值间的一致程度。 （二）分析特异性（Analytical Specificity）：测量程序只测量被测量物的能力。用于描述检测程序在样本中有其他物质存在时只测量被测量物的能力。通常以一个被评估的潜在干扰物清单来描述，并给出在特定医学相关浓度值水平的分析干扰程度。（潜在干扰物包括干扰物和交叉反应物） （三）线性（Linearity）：在给定测量范围内，给出的测量结果与样品中实际存在的被测量物的值成比例的能力。线性是描述一个测量系统的测量示值或测量结果相关于样本的赋值符合直线的属性。 （四）精密度（Precision）：在规定条件下，相互独立的测试结果之间的一致程度。精密度的程度是用统计学方法得到的测量不精密度的数字形式表示，如标准差（SD）和变异系数（CV）。 五、参考文献 （一）《体外诊断试剂注册管理办法》（国家食品药品监督管理总局令第5号） （二）《关于发布体外诊断试剂临床试验技术指导原则的通告》（国家食品药品监督管理总局通告2014年第16号） （三）《关于发布体外诊断试剂说明书编写指导原则的通告》（国家食品药品监督管理总局通告2014年第17号） （四）《全国临床检验操作规范》（第三版），中华人民共和国卫生部医政司 （五）《临床化学常用项目自动分析法》（第三版），辽宁科技出版社 （六）GB/T 21415—2008 体外诊断医疗器械 生物样品中量的测量 校准品和控制物质赋值的计量学溯源性 （七）GB/T 26124—2011 临床化学体外诊断试剂（盒） （八）YY/T 0638—2008 体外诊断医疗器械 生物样品中量的测量 校准品和控制物质物中酶催化浓度赋值的计量学溯源性 （九）YY/T0466.1—2009 医疗器械 用于医疗器械标签、标记和提供信息的符号 第1部分：通用要求 （十）YY/T 1241—2014 乳酸脱氢酶测定试剂(盒) （十一）YY/T 1227—2014 临床化学体外诊断试剂(盒)命名 乳酸脱氢酶测定试剂盒 注册技术审查指导原则编写说明 一、编写目的和背景 （一）本指导原则编写的目的是用于指导和规范乳酸脱氢酶测定试剂盒产品注册申报过程中审查人员对注册材料的技术审评；同时也可指导注册申请人的产品注册申报。 （二）本指导原则旨在让初次接触该类产品的注册审查人员对产品诊断方法或原理、主要组分、主要性能指标、临床用途等各个方面进行基本了解，同时让技术审查人员在产品注册技术审评时把握基本的要求尺度，以确保产品的安全、有效。 （三）本指导原则中的乳酸脱氢酶测定试剂盒是指基于分光光度法原理对人血清、血浆或其他体液中的乳酸脱氢酶活性进行体外定量分析的试剂。 （四）本指导原则中的术语、定义采用GB/T 26124—2011《临床化学体外诊断试剂(盒)》标准的术语和定义。 二、编写依据 （一）《医疗器械监督管理条例》（国务院令第650号） （二）《体外诊断试剂注册管理办法》（国家食品药品监督管理总局令第5号） （三）《关于公布体外诊断试剂注册申报资料要求和批准证明文件格式》（国家食品药品监督管理总局公告2014年第44号） （四）《关于发布体外诊断试剂说明书编写指导原则的通告》（国家食品药品监督管理总局通告2014年第17号） （五）《关于发布医疗器械产品技术要求编写指导原则的通告》（国家食品药品监督管理总局通告2014年第9号） （六）《关于发布体外诊断试剂临床试验技术指导原则的通告》（国家食品药品监督管理总局通告2014年第16号） （七）GB/T 26124—2011临床化学体外诊断试剂(盒) （八）YY/T 1241—2014 乳酸脱氢酶测定试剂（盒） （九）YY/T 1227—2014 临床化学体外诊断试剂(盒)命名 （十）国家食品药品监督管理部门发布的其他规范性文件 三、重点内容说明 （一）指导原则主要根据体外诊断试剂产品注册申报资料的要求，借鉴国家食品药品监督管理部门已发布的相关产品注册技术审查指导原则的体例进行编写，以便于注册技术审评人员理解。 （二）在产品综述资料中，全面介绍了该类体外诊断试剂产品的预期用途、产品描述、方法学特征、生物安全性评价、研究结果总结以及同类产品上市情况介绍等内容。 （三）本指导原则不涉及产品作用机理的内容，主要描述相应的诊断方法和原理。 （四）产品应适用的相关标准中给出了现行有效的国家标准、行业标准（包括产品标准、基础标准），以及相应的国际标准。 （五）产品的主要性能指标中给出了产品需要考虑的各个方面，主要提出共性要求，具体量化指标需要参照相关的国家标准、行业标准和生产商技术能力予以确定。 四、指导原则编写单位和人员 本指导原则的编写成员由河北省食品药品监督管理局医疗器械监管处注册技术审评人员、行政审批人员、河北省医疗器械与药品包装材料检验研究院、临床专家及相关企业技术人员共同组成。 丙氨酸氨基转移酶测定试剂盒 注册技术审查指导原则（征求意见稿） 本指导原则的主要目的是规范丙氨酸氨基转移酶测定试剂盒的技术审评工作，帮助审评人员理解和掌握该类产品的原理、组成、性能、预期用途等内容，明确技术审评过程中应该关注和重点把握的内容，对产品安全性、有效性作出系统评价。 本指导原则是对丙氨酸氨基转移酶测定试剂盒的一般要求，审评人员应依据产品的具体特性确定其中的具体内容是否适用并对注册申报资料的内容进行补充要求。 本指导原则是对技术审查人员的指导性文件，但不包括注册 审批所涉及的行政事项，亦不作为法规强制执行，如果有能够满足相关法规要求的其他方法，也可以采用，但是需要提供详细的研究资料和验证资料。应在遵循相关法规、国家标准、行业标准的前提下使用本指导原则。 本指导原则是在现行法规和标准体系以及当前认知水平下制定的，随着法规和标准的不断完善，以及科学技术的不断发展，本指导原则相关内容也将进行适时的调整。 一、适用范围 丙氨酸氨基转移酶测定试剂盒用于体外定量测定人血清或血浆中的丙氨酸氨基转移酶的活性。本指导原则适用于进行首次注册申报和相关许可事项变更的产品。 丙氨酸氨基转移酶活性的测定方法目前主要有丙氨酸底物法、丙氨酸底物-丙酮酸氧化酶法和2,4-二硝基苯肼法等。丙氨酸氨基转移酶活性的测定方法目前主要为丙氨酸底物法。本法采用的原理是在ALT的催化下，L-丙氨酸的氨基转移至α-酮戊二酸，生成丙酮酸和L-谷氨酸。丙酮酸与NADH在LDH的催化下反应生成乳酸和NAD+。NADH在特定波长 — 1 —（如：340nm处）有特异吸收峰，其氧化的速率与血清中ALT的活性成正比，在此波长处测定NADH吸光度下降的速率，即可计算出ALT活性。从方法学考虑，本指导原则主要指采用丙氨酸氨基转移酶催化L-丙酮酸和α-酮戊二酸之间的氨基转移反应，通过在特定波长处吸光度的变化，计算丙氨酸氨基转移酶活性，利用全自动、半自动生化分析仪或分光光度计，在医学实验室进行丙氨酸氨基转移酶定量测定所使用的临床化学体外诊断试剂。本文不适用于干式丙氨酸氨基转移酶测定试剂。丙氨酸氨基转移酶同工酶试剂不属于本指导原则涵盖的范畴。 依据《体外诊断试剂注册管理办法》、《食品药品监管总局关于印发体外诊断试剂分类子目录的通知》（食药监械管〔2013〕242号），丙氨酸氨基转移酶检测试剂属于酶类检测试剂，管理类别为Ⅱ类，分类代号为6840。 二、注册申报资料要求 （一）综述资料 综述资料主要包括产品预期用途、产品描述、生物安全性评价、研究结果总结以及同类产品上市情况介绍等内容，应符合《体外诊断试剂注册管理办法》（以下简称《办法》）和《体外诊断试剂注册申报资料要求》（2014年第44号）的相关要求。相关描述应至少包含如下内容： 1.产品预期用途及相关的临床适应症背景情况： （1）丙氨酸氨基转移酶的生物学特征、结构与功能，在体内正常和病理状态下的代谢途径和存在形式。 （2）与预期用途相关的临床适应症背景情况，如临床相关疾病的发生、实验室诊断方法等。 2.产品描述：包括产品所采用的技术原理，主要原材料的来源及制备方法，主要生产工艺过程，质控品、校准品的制备方法及溯源（定值）情况。— 2 — 3.有关生物安全性方面的说明：由于体外诊断试剂中的主要原材料可能是由各种动物、病原体、人源的组织和体液等生物材料经处理或添加某些物质制备而成，人源性材料须对有关传染病（HIV、HBV、HCV等）病原体检测予以说明，并提供相关的证明文件。其他动物源及微生物来源的材料，应当提供相应的说明文件，为保证产品在运输、使用过程中对使用者和环境的安全，应提供对上述原材料所采用的灭活等试验方法的说明。 4.有关产品主要研究结果的总结和评价。 5.其他：包括同类产品在国内外批准上市的情况。相关产品所采用的技术方法及临床应用情况，申请注册产品与国内外同类产品的异同等。 （二）主要原材料研究资料（如需提供） 包括主要反应成分、质控品、校准品等的选择、制备、质量标准确定的方法及研究资料；校准品应提供详细的量值溯源资料，包括定值试验资料和溯源性文件等；质控品应提供详细的定值资料。 （三）主要生产工艺和反应体系的研究资料（如需提供） 主要工艺包括：配制、分装等描述及确定依据，应包含产品的工艺流程图和关键控制点；反应体系包括样本采集及处理、样本要求、试剂用量、反应条件（温度、时间等）等研究资料。不同适用机型的反应条件如果有差异应分别详述。 （四）分析性能评估资料 申请人应当提交产品研制或成品验证阶段对试剂盒进行的所有性能验证的研究资料，对于每项分析性能的评价都应包括具体的研究项目、实验设计、研究方法、可接受标准、试验数据、统计方法、研究结论等详细资料。性能评估时应将试剂和所选用的校准品、质控品作为一个整体进行评价，评估整个系统的性能是否符合要求。有关分析性能验证的背景信息也应在申报资料中有所体现，包括实验时间、地点、检验人员、— 3 — 适用仪器、试剂规格和批号、所选用的校准品和质控品、临床样本来源等。 性能评估应至少包括准确度、精密度、线性区间、最低检测限、分析灵敏度、分析特异性、其它影响检测的因素等。1.准确度 对测量准确度的评价包括：与国家标准物质（和/或国际标准物质）的偏差分析、方法学比对等方法，企业可根据实际情况选择合理方法进行研究。 1.1与国家（国际）参考物质的比对研究 使用国家参考物质或国际参考物质作为样本进行测试，重复测定3次，计算平均值与标示值的相对偏差。 或用由参考方法定值的高、低2个浓度的人血清对试剂盒进行测试，每个浓度样品重复测定3次，分别取测试结果均值，计算相对偏差。1.2回收试验 在人血清样品中加入一定体积标准或校准品溶液或纯品，每个浓度重复测定3次，计算回收率。回收试验注意事项： 1.2.1加入的标准溶液体积与血清体积比应不大于1:20或其体积比不会产生基质的变化； 1.2.2加入标准溶液或校准品溶液后样品总浓度应在试剂（盒）测定线性范围内； 1.2.3标准溶液或校准品应有溯源性； 1.3比对试验 采用参考方法或国内/国际普遍认为质量较好的已上市同类试剂作为参比方法，与拟申报试剂同时检测一批病人样品（至少40例样本），从测定结果间的差异了解拟申报试剂与参比方法间的偏倚。如偏倚很小或— 4 — 在允许的误差范围内，说明两检测系统对病人标本测定结果基本相符，对同一份临床样本的医学解释，拟申报试剂与参比方法相比不会产生差异结果。 在实施方法学比对前，应分别对拟申报试剂和参比试剂进行初步评估，只有在确认两者都分别符合各自相关的质量标准后方可进行比对试验。方法学比对时应注意质量控制、样本类型、浓度分布范围并对结果进行合理的统计学分析。2精密度 2.1批内精密度 测量精密度的评估应至少包括高、低两个浓度水平的样本进行，两个浓度都应在试剂盒的测量范围内且有一定的临床意义，通常选用该检测指标的正常参考值附近和异常高值样本。批内精密度应不大于5.0%。2.2批间精密度 用一份样本分别测试3个不同批号的试剂（盒），每个批号测定3次，测定均值。按相对极差（R）＝（Xmax-Xmin）/Xt×100% 公式计算。相对极差应不大于10.0%。3.线性区间 建立试剂线性区间所用的样本基质应尽可能与临床实际检测的样本相似，理想的样本为分析物浓度接近预期测定上限的混合人血清，且应充分考虑多倍稀释对样本基质的影响。 以接近线性范围上限的高浓度（活性）样品和接近线性区间下限的低浓度（活性）样品，混合成至少5个稀释浓度（xi）。分别测试试剂盒，每个稀释浓度测试3次，分别求出测定结果的均值（yi）。以稀释浓度（xi）为自变量，以测定结果均值（yi）为因变量求出线性回归方程，并计算线性相关系数（r）。线性范围上限至少达500U/L, 线性相关系数r应不小于0.9900。 — 5 — 4.最低检测限 最低检测限的确定常使用同批号试剂对零浓度校准品（或样品稀释液）进行至少20次重复检测，平均值加2倍SD（≥95%置信区间）即试剂的最低检测限。5.分析灵敏度 5.1 速率法 用已知浓度或活性的样品进行测试，记录在试剂（盒）规定参数下产生的吸光度改变。换算为单位吸光度差值（ΔA）或吸光度变化应符合企业给定区间。5.2 终点法 稀释一定浓度样品（n单位被测物），测定吸光度，计算吸光度值与空白吸光度值有差别的样品浓度应符合企业给定区间。6.分析特异性 对样本中常见的干扰物质进行检测，如胆红素、血红蛋白、甘油三酯等。方法为对模拟添加样本分别进行验证，样本量选择应体现一定的统计学意义，说明样本的制备方法及干扰实验的评价标准，确定可接受的干扰物质极限浓度。 药物干扰的研究可根据需要由申请人选择是否进行或选择何种药物及其浓度进行。 7.校准品溯源及质控品赋值 校准品、质控品应提供详细的量值溯源资料，包括定值试验资料和溯源SOP文件等。应参照GB/T 21415—2008《体外诊断医疗器械 生物样品中量的测量 校准品和控制物质赋值的计量学溯源性》的要求，提供企业（工作）校准品及试剂盒配套校准品定值及不确定度计算记录，提供质控品赋值及其靶值范围确定的记录。 — 6 — 8.其他需注意问题 应当对多批产品进行性能评估，对结果进行统计分析。不同适用机型、不同包装规格，应分别提交分析性能评估报告。如注册申请中包含不同的包装规格，需要对不同包装规格之间的差异进行分析或验证。如不同的包装规格产品间存在性能差异，需要提交采用每个包装规格产品进行的上述项目评估的试验资料及总结。如不同包装规格之间不存在性能差异，需要提交包装规格之间不存在性能差异的详细说明，具体说明不同包装规格之间的差别及可能产生的影响。 （五）参考区间确定资料 应提交建立参考区间所采用样本来源及详细的试验资料。应明确参考人群的筛选标准，研究各组（如性别、年龄等）例数不应低于120例。若引用针对中国人群参考值范围研究的相关文献，应明确说明出处，并进行验证。参考值研究结论应在说明书【参考区间】的相应描述保持一致。 （六）稳定性研究资料 稳定性研究资料主要涉及两部分内容，申报试剂的稳定性和适用样本的稳定性研究。 试剂的稳定性包括实时稳定性、运输稳定性、开瓶（待机）稳定性及冻融次数限制等，申请人应至少提供3个生产批次的实时稳定性、开瓶稳定性和运输稳定性研究资料，包括研究目的、材料和方法、研究结论等，研究应涵盖产品的主要性能指标，申请人应至少能提供稳定性末期的除装量和批间差外的评价资料。试剂的稳定性研究应注意选取代表性包装规格进行研究（例如：校准品稳定性应选取最易受影响的最小装量，干粉剂型应提供复溶稳定性研究资料），实时稳定性研究的时间间隔应不大于3个月。 适用样本的稳定性主要包括室温保存、冷藏和冷冻条件下的有效期验 — 7 — 证，可以在合理温度范围内选择温度点（温度范围），每间隔一定的时间段即对储存样本进行全性能的分析验证，从而确认不同类型样本的效期稳定性。适于冷冻保存的样本还应对冻融次数进行评价。 试剂稳定性和样本稳定性两部分内容的研究结果均应在说明书【储存条件及有效期】和【样本要求】两项中进行详细说明。 （七）临床试验研究 临床评价资料应符合《体外诊断试剂临床试验技术指导原则》（国家食品药品监督管理总局通告2014年第16号）的要求，同时研究资料的形式应符合《关于公布体外诊断试剂注册申报资料要求和批准证明文件格式的公告》（国家食品药品监督管理总局公告2014年第44号）临床研究资料有关的规定。下面仅对临床实验中的基本问题进行阐述。1.研究方法 选择境内已批准上市的性能不低于拟申报产品的同类产品作为对照试剂，采用拟申报产品（以下称待评试剂）与之进行对比试验研究，证明本品与已上市产品等效。2.临床研究单位的选择 应选择至少两家临床试验机构，体外诊断试剂的临床试验机构应获得国家食品药品监督管理总局资质认可。临床试验机构实验操作人员应有足够的时间熟悉检测系统的各环节（试剂、质控及操作程序等），熟悉评价方案。在整个实验中，待评试剂和对照试剂都应处于有效的质量控制下，最大限度保证试验数据的准确性及可重复性。3.临床试验方案 临床试验实施前，研究人员应从流行病学、统计学、临床医学、检验医学等多方面考虑，设计科学合理的临床研究方案。建议临床前开展预试验工作，最大限度地控制试验误差。各临床试验机构的方案设置应保持一致，且保证在整个临床试验过程中遵循预定的方案实施，不可随意— 8 — 改动。整个试验过程应在临床试验机构的实验室内并由本实验室的技术人员操作完成，申报单位的技术人员除进行必要的技术指导外，不得随意干涉实验进程，尤其是数据收集过程。 试验方案中应确定严格的病例纳入/排除标准，任何已经入选的病例再被排除出临床研究都应记录在案并明确说明原因。在试验操作过程中和判定试验结果时应采用盲法以保证试验结果的客观性。各临床试验机构选用的参比试剂应保持一致，以便进行合理的统计学分析。另外，待评试剂的样本类型应不超越参比试剂的样本类型。 临床试验方案必须获得临床试验机构伦理委员会的同意。4.研究对象选择 临床试验应选择具有特定症状/体征人群作为研究对象。企业在建立病例纳入标准时，应考虑到不同人群的差异，尽量覆盖各类适用人群。在进行结果统计分析时，建议对各类人群分别进行数据统计分析。总体样本数不少于200例，异常值样本比例应不低于试验总量的30%。样本中待测物浓度应覆盖待评试剂线性范围，且尽可能均匀分布。应明确样本存贮条件、可否冻融等要求及避免使用的样本，血浆应明确抗凝剂的要求。实验中，尽可能使用新鲜样本，避免贮存。如无法避免使用贮存样品时，注明贮存条件及时间，在数据分析时应考虑其影响。如果待评试剂同时适用于血清和血浆样本类型，可完成一个样本类型不少于200例的临床研究，同时验证其中至少100例受试者的自身血清、血浆样本测试结果间的一致性（采用待评试剂检测），其中不同浓度样本分布情况与总例数中分布情况应一致。也可以分别对同时适用的多个样本类型按照《体外诊断试剂临床试验技术指导原则》（国家食品药品监督管理总局通告2014年第16号）中试验样本量一般要求规定的200例进行试验，异常值参照上述规定。 涉及产品检测条件优化、增加与原样本类型具有可比性的其他样本类 — 9 — 型等变更事项，临床试验采用变更后产品与变更前产品或者已上市同类产品进行比对试验，在至少2家（含2家）临床试验机构开展临床试验，总样本数不少于100例，异常值样本数不少于30%。5.统计学分析 对临床试验结果的统计应选择合适的统计方法，如相关分析、线性回归、绝对偏倚/偏差及相对偏倚/偏差分析等。对于对比实验的等效性研究，最常用是对待评试剂和参比试剂两组检测结果的相关及线性回归分析，应重点观察相关系数（r值）或判定系数（R2）、回归拟合方程（斜率和y轴截距）等指标。结合临床试验数据的正/偏态分布情况，建议统计学负责人选择合理的统计学方法进行分析，统计分析应可以证明两种方法的检测结果无明显统计学差异。在临床研究方案中应明确统计检验假设，即评价待评试剂与参比试剂是否等效的标准。6.临床试验总结报告撰写 根据《体外诊断试剂临床试验技术指导原则》（国家食品药品监督管理总局公告2014年第16号）的要求，临床试验报告应该对试验的整体设计及各个关键点给予清晰、完整的阐述，应该对整个临床试验实施过程、结果分析、结论等进行条理分明的描述，并应包括必要的基础数据和统计分析方法。建议在临床总结报告中对以下内容进行详述。6.1临床试验总体设计及方案描述 6.1.1临床试验的整体管理情况、临床试验机构选择、临床主要研究人员简介等基本情况介绍。 6.1.2纳入/排除标准、不同人群的预期选择例数及标准。6.1.3样本类型，样本的收集、处理及保存等。6.1.4统计学方法、统计软件、评价统计结果的标准。6.2具体的临床试验情况 6.2.1待评价试剂和参比试剂的名称、批号、有效期及所用机型等信— 10 — 息。 6.2.2对各研究单位的病例数、人群分布情况进行总合，建议以列表或图示方式给出具体例数及百分比。 6.2.3质量控制，试验人员培训、仪器日常维护、仪器校准、质控品运行情况，对检测精密度、质控品回收（或测量值）、抽查结果评估。6.2.4具体试验过程，样本检测、数据收集、样本长期保存等。6.3统计学分析 6.3.1数据预处理、对异常值或离群值的处理、研究过程中是否涉及对方案的修改。 6.3.2定量值相关性和一致性分析 用回归分析验证两种试剂结果的相关性，以y=a+bx和R2的形式给出回归分析的拟合方程，其中：y是待评试剂结果，x是参比试剂结果，b是方程斜率，a是y轴截距，R2是判定系数（通常要求R2≥0.95）。6.4讨论和结论 对总体结果进行总结性描述并简要分析试验结果，对本次临床研究有无特别说明，最后得出临床试验结论。 （八）产品风险分析资料 对体外诊断试剂产品寿命周期的各个环节,从预期用途、可能的使用错误、与安全性有关的特征、已知和可预见的危害等方面的判定以及对患者风险的估计进行风险分析、风险评价和相应的风险控制基础上，形成风险管理报告。应当符合相关行业标准的要求。 风险分析应包含但不仅限于以下方面的内容：预期用途错误包括：设计开始时未设定预期分析物、未作适用机型验证、未针对特定的样本类型验证。性能特征失效包括：精密度失效、准确度失效、非特异性、稳定性失效、测量范围失效、定性/定量失效、量值溯源失效、校准失效。不正确的结果包括：配方错误、采购的原料未能达到设计要求的性能、— 11 — 原材料储存条件不正确、使用了过期的原材料、反应体系不正确、试剂与包装材料不相容。可能的使用错误包括：生产者未按照生产流程操作，检验者未按照原料、半成品、成品检验标准操作，装配过程组份、标签、说明书等漏装或误装，成品储存或运输不当，客户未参照产品说明书设置参数或使用。与安全性有关的特征包括：有毒化学试剂的化学污染、样本的潜在生物污染、不可回收包装或塑料的环境污染。 （九）产品技术要求 申请人应当在原材料质量和生产工艺稳定的前提下,根据申请人产品研制、前期临床评价等结果,依据国家标准、行业标准及有关文献，按照《医疗器械产品技术要求编写指导原则》（国家食品药品监督管理总局通告2014年第9号）的有关要求，编写产品技术要求，内容主要包含产品性能指标和检验方法。 进口产品的产品技术要求应当包括英文版和中文版，英文版应当由申请人签章，中文版由申请人或其代理人签章。 下面就产品技术要求中涉及的产品适用的相关标准和主要性能指标等相关内容作简要叙述。产品适用的相关标准： （1）GB/T 21415—2008体外诊断医疗器械 生物样品中量的测量 校准品和控制物质赋值的计量学溯源性 （2）YY/T 0638—2008体外诊断医疗器械 生物样品中量的测量 校准品和控制物质物中酶催化浓度赋值的计量学溯源性（3）GB/T 26124-2011 临床化学体外诊断试剂（盒） （4）YY/T 1197-2013丙氨酸氨基转移酶测定试剂盒（IFCC法）（5）WS/T 404.1-2012临床常用生化检验项目参考区间血清丙氨酸氨基转移酶、天门冬氨酸氨基转移酶、丙氨酸氨基转移酶和γ-谷氨酰基转移酶 — 12 — 2.主要性能指标： 2.1外观： 符合制造商规定的正常外观要求。2.2装量： 液体试剂的装量应不少于标示量。2.3试剂空白 2.3.1空白吸光度： 用蒸馏水、去离子水或其他指定溶液作为空白加入工作试剂作为样品测试时，试剂空白吸光度应不小于1.0（340nm,1cm)。2.3.2空白吸光度变化率（终点法不适用）： 用蒸馏水、去离子水或其他指定溶液作为空白加入工作试剂作为样品测试时，试剂空白吸光度变化率△A/min(37℃，340nm,1cm)应不大于0.004。 2.4分析灵敏度 2.4.1速率法：用已知浓度或活性的样品进行测试，记录在试剂（盒）规定参数下产生的吸光度改变。换算为单位吸光度差值（ΔA）或吸光度变化应符合制造商给定区间。 2.4.2终点法：稀释一定浓度（n单位）的样品（检测限样品），测定吸光度，计算吸光度值能够与空白吸光度区分的样品浓度应符合制造商给定区间。2.5线性区间 线性区间上限至少达到500 U/L。2.5.1相关系数（r） 线性相关系数r应不小于0.9900（线性范围下限应不低于产品的最低检测线，不高于参考区间下限）。2.5.2线性偏差 — 13 — 线性偏差应不超过申请人给定值。线性偏差可分段描述或连续描述，若分段描述，应注意分段点的确定。2.6精密度 2.6.1批内精密度 测量精密度的评估应至少包括高、低两个浓度水平的样本进行，两个浓度都应在试剂盒的测量范围内且有一定的临床意义，通常选用该检测指标的正常参考值附近和异常高值样本。批内精密度应不大于5.0%。2.6.2 批间精密度 用一份质控品分别测试3个不同批号的试剂（盒），每个批号测定3次，测定均值。相对极差应不大于10.0%。2.7准确度 2.7.1相对偏差 提供参考物质或用参考方法定值的血清测定，实测值与标示值偏差应在±15.0%范围内。 2.7.2回收试验 在临床样本中加入一定体积标准溶液（标准溶液体积与临床样本体积应不会产生基质的变化，加入标准溶液后样品总浓度必须在试剂（盒）测定线性范围内）或纯品，回收试验一般选取两个或两个以上浓度进行，回收率应在90%～110%之间。 2.7.3比对试验 用待测试剂盒与申请人选定分析系统（已在国内上市）分别检测不少于40个在检测范围内的人源样品，用线性回归方法计算两组结果的相关系数r≥0.990以及每个浓度点的偏差，偏差应不超过申请人给定值。偏差可分段描述或连续描述，若分段描述，应注意分段点的确定。 建议按上述优先顺序，采用上述方法之一测试试剂盒的准确度。2.8稳定性 检测申请人声称已到期试剂，产品性能应符合试剂空白、分析灵敏度、线性区间、精密度、准确度要求。冻干品应同时进行复溶稳定性试验，— 14 — 产品性能应符合试剂空白、分析灵敏度、线性区间、测量精密度、准确度要求。 2.9校准品和质控品的性能指标（如产品中包含） 应至少包含外观、装量（干粉试剂可不做）、准确性、均一性、稳定性。冻干型校准品和质控品还应检测批内瓶间差和复溶稳定性。 （十）注册检验 具有相应医疗器械检验资质的医疗器械检验机构出具的注册检验报告和产品技术要求预评价意见。丙氨酸氨基转移酶项目目前有国家参考物质和国际参考物质，应当使用国家参考品或国际参考物质进行注册检验，并符合相关要求。 （十一）产品说明书 说明书承载了产品预期用途、检验原理、检测结果解释以及注意事项等重要信息，是指导实验室工作人员正确操作、临床医生针对检验结果给出合理医学解释的重要依据，因此，产品说明书是体外诊断试剂注册申报最重要的文件之一。 结合《体外诊断试剂说明书编写指导原则》（国家食品药品监督管理总局通告2014年第17号）的要求，下面对丙氨酸氨基转移酶测定试剂盒说明书的重点内容进行详细说明。1.【产品名称】 （1）通用名称，试剂（盒）名称由三部分组成：被测物名称、用途、方法或原理。例如：丙氨酸氨基转移酶测定试剂盒（丙氨酸底物法）。通用名称应当按照《体外诊断试剂注册管理办法》规定的命名原则进行命名，可适当参考相关“分类目录”和/或国家标准及行业标准。（2）英文名称应当正确、完整、直译，不宜只写缩写。2.【包装规格】 注明可测试的样本数或装量，如××测试/盒、××人份/盒、××mL，— 15 — 除国际通用计量单位外，其余内容均应采用中文进行表述。包装规格应明确单、双或其他多试剂类型。 3.【预期用途】应至少包括以下几部分内容： 3.1说明试剂盒用于体外定量检测血清/血浆中丙氨酸氨基转移酶的活性；同时应明确与目的检测物相关的临床适应症背景情况。3.2丙氨酸氨基转移酶异常情况常见于哪些疾病，其升高或降低可能有哪些医学解释。 如：丙氨酸氨基转移酶主要用于辅助评价肝功能。ALT是反映肝损伤的灵敏指标，各种急性肝损伤（如急性传染性肝炎及药物或酒精中毒）时，血清ALT可在临床症状（如黄疸）出现之前急剧升高等，并一般与病情轻重和恢复情况相平行；慢性肝炎、脂肪肝、肝硬化、肝淤血等血清ALT也可升高。另外，胆囊炎、胆石症、胰腺炎、心肌梗死及服用某些药物（如氯丙嗪、奎宁、水杨酸制剂等）时可见血清ALT升高。作为支持性资料，申请人应提供由教科书、临床专著、核心期刊文献或英文SCI文献等有关临床适应症背景的资料。 4.【检验原理】应结合产品主要成分简要说明检验的原理、方法，必要时可采取图示方法表示，检测原理的描述应结合产品主要组成成分、被测物和产物的关系进行描述： 如：在ALT的催化下，丙氨酸的氨基转移到α-酮戊二酸，生成丙酮酸及谷氨酸。丙酮酸与NADH在LDH的催化下反应生成乳酸和NAD-。NADH在波长340nm有特异吸收峰，其氧化的速率与血清中ALT的活性成正比，在340nm处测定NADH吸光度下降的速率，即可计算出ALT活性。 ALT 谷氨酸+丙氨酸 丙氨酸+α-酮戊二酸 LDH 乳酸+NAD 丙氨酸+NADH+H+ +5.【主要组成成份】应明确以下内容： 试剂盒提供的试剂组分的名称、比例或浓度，各组分是否可以互换；— 16 — 如含有校准品或质控品，除明确组成成份及生物学来源外，还应明确其定值及溯源性，溯源性应写明溯源的最高级别，包括标准物质或参考物的发布单位及编号，质控品应明确靶值范围。例如： 本试剂盒由试剂 1、试剂2和校准品（选购）组成： 试剂1： 三羟甲基氨基甲烷缓冲液 100mmol/L，L-丙氨酸 500mmol/L，乳酸脱氢酶 1700U/L 试剂2：α-酮戊二酸15mmol/L，NADH 0.18mmol/L 校准品：含有丙氨酸氨基转移酶的溶液，校准品具有批特异性，每批定值，定值见瓶签标示，量值可溯源至国家参考物质或国际参考物质。6.【储存条件及有效期】应明确未开封的试剂实际储存条件及有效期，开封后的待机稳定期或开瓶稳定期。干粉试剂应明确复溶稳定期。注：保存条件不应有模糊表述，如“常温”、“室温”。7.【适用仪器】应明确可适用的具体品牌、型号的生化分析仪器。8.【样本要求】重点明确以下内容：样本类型、处理、保存期限及保存条件（短期、长期），运输条件,对已知干扰物的抗干扰性（如：存在的干扰因素，明确黄疸、溶血、脂浊及药物等内、外源性干扰物对测定的影响，同时列出干扰物的具体浓度）等。如有血浆样本，应注明对抗凝剂的要求（如：草酸盐、柠檬酸盐、EDTA钠盐对丙氨酸氨基转移酶活性造成干扰，应明确避免使用的提示）。冷藏/冷冻样本检测前是否须恢复室温，可冻融次数。 9.【检验方法】详细说明试验操作的各个步骤，包括： 9.1试剂配制方法、注意事项； 9.2试验条件：温度、时间、测定主/副波长、试剂用量、样本用量、测定方法、反应类型、反应方向、反应时间等以及试验过程中的注意事项； — 17 — 9.3校准程序：校准品的使用方法、注意事项、校准曲线的绘制。9.4质量控制程序：质控品的使用方法、质量控制方法。 9.5试验结果的计算或读取：应明确检验结果的计算方法。包括对每个系数及对每个计算步骤的解释。 10.【参考区间】应注明常用样本类型的正常参考区间，并说明参考值确定方法。 11.【检验结果的解释】说明可能对检验结果产生影响的因素，在何种情况下需要进行确认试验。 12.【检验方法的局限性】说明该检验方法的局限性。当测定值超出线性上限时，应说明使用厂家提供的专用稀释液或明确稀释方法，并给出稀释最大倍数说明。 13.【产品性能指标】至少应详述以下性能指标，性能指标应与技术要求有关技术指标的要求一致。13.1试剂空白； 13.2分析灵敏度； 13.3准确度； 13.4精密度（批内精密度和批间精密度）； 13.5线性区间（线性相关系数和线性偏差）。14.【注意事项】应至少包括以下内容： 14.1本试剂盒的检测结果仅供临床参考，对患者的临床管理应结合其症状/体征、病史、其他实验室检查及治疗反应等情况综合考虑。14.2本试剂盒仅供体外诊断用，试剂中含有的化学成分接触人体后是否会产生不良的影响后果。 14.3采用不同方法学的试剂检测所得结果不应直接相互比较，以免造成错误的医学解释。 14.4 有关人源组分的警告，如：试剂盒内的质控品、校准品或其他— 18 — 人源组分，虽已经通过了HBs-Ag、HIV1/2-Ab、HCV-Ab等项目的检测，但截至目前，没有任何一项检测可以确保绝对安全，故仍应将这些组分作为潜在传染源对待。 14.5对所有样本和反应废弃物都应视为传染源对待。14.6其他有关丙氨酸氨基转移酶测定的注意事项。 15.【标识的解释】如有图形或符号，请解释其代表的意义。16.【参考文献】注明引用参考文献，其书写应清楚、易查询且格式规范统一。17.【基本信息】 17.1境内体外诊断试剂 17.1.1注册人与生产企业为同一企业的，按以下格式标注基本信息： 注册人/生产企业名称，住所，联系方式，售后服务单位名称，联系方式，生产地址，生产许可证编号，生产日期 17.1.2委托生产的按照以下格式标注基本信息： 注册人名称，住所，联系方式，售后服务单位名称，联系方式，受托企业的名称，住所，生产地址，生产许可证编号，生产日期 17.2进口体外诊断试剂 按照以下格式标注基本信息： 注册人/生产企业名称，住所，生产地址，联系方式，售后服务单位名称，联系方式，代理人的名称，住所，联系方式，生产日期 18 【医疗器械注册证编号/产品技术要求编号】应当写明医疗器械注册证编号/产品技术要求编号 【说明书核准日期及修改日期】应注明该产品说明书的核准日期。如曾进行过说明书的变更申请，还应该同时注明说明书的修改日期。 三、参考文献： 1.《体外诊断试剂注册管理办法》（国家食品药品监督管理总局令第 — 19 — 5号） 2.《医疗器械说明书和标签管理规定》（国家食品药品监督管理总局令第6号） 3.《体外诊断试剂临床试验技术指导原则》（国家食品药品监督管理总局通告2014年第16号） 4.《体外诊断试剂说明书编写指导原则》（国家食品药品监督管理总局通告2014年第17号） 5.《关于公布体外诊断试剂注册申报资料要求和批准证明文件格式的公告》（国家食品药品监督管理总局公告2014年第44号） 6.全国临床检验操作规程（第4版）（原中华人民共和国卫生部医政司） 7.GB/T 21415-2008《体外诊断医疗器械 生物样品中量的测量 校准品和控制物质赋值的计量学溯源性》 8.GB/T 26124-2011《临床化学体外诊断试剂（盒）》 9.YY/T 0638—2008体外诊断医疗器械 生物样品中量的测量 校准品和控制物质物中酶催化浓度赋值的计量学溯源性 10.YY/T 1197-2013《丙氨酸氨基转移酶测定试剂盒（IFCC法）》 11.YY/T 1227-2014《临床化学体外诊断试剂（盒）命名》 12.WS/T 404.1-2012临床常用生化检验项目参考区间血清丙氨酸氨基转移酶、天门冬氨酸氨基转移酶、丙氨酸氨基转移酶和γ-谷氨酰基转移酶 — 20 — 丙氨酸氨基转移酶测定试剂盒 注册技术审查指导原则编写说明 一、编写原则 编制本指导原则旨在指导和规范注册申请人对丙氨酸氨基转移酶(Alanine aminotransferase，简称ALT)测定试剂盒注册申报资料的准备及撰写工作，同时帮助审查人员理解和掌握该类产品原理、组成、性能、预期用途等内容，把握技术审评工作基本要求和尺度，对产品安全性、有效性作出系统评价。 由于丙氨酸氨基转移酶测定试剂盒产品仍在不断发展，审查人员仍需从风险分析的角度认真确定申报产品的预期用途与风险管理是否相当；由于我国医疗器械法规框架仍在构建中，审查人员仍需密切关注相关法规、标准及最新进展，关注审评产品实际组成、原理、预期用途等方面的个性特征，以保证产品审评符合现行法规安全、有效的要求。 二、指导原则部分内容说明 （一）指导原则主要根据体外诊断试剂产品注册申报资料的要求，借鉴国家食品药品监督管理部门已发布的相关产品注册技术审查指导原则的体例进行编写，以便于注册技术审评人员理解。 （二）产品的主要技术指标制定主要参考相关国家标准、行业标准YY/T 1197—2013《丙氨酸氨基转移酶测定试剂盒（IFCC法）》、GB/T 26124—2011《临床化学体外诊断试剂（盒）》。 （三）关于检测样本类型说明：本指导原则起草过程中检索了全国范围内已上市同类产品的注册信息，同时查阅了有关临床专著，未能查询到其他样本类型中丙氨酸氨基转移酶与临床适应症的直接对应关系。为避免对注册申报企业和审评人员造成误导，本指导原则的适用范围仅限于血清、血浆两种样本类型。 （四）关于产品名称说明：本指导原则关于产品方法学名称的举例参考YY/T 1227-2014《临床化学体外诊断试剂（盒）命名》，同时参考了已上市的丙氨酸氨基转移酶测定试剂盒产品（如：将连续监测法/速率法规范为丙氨酸底物法，将赖氏法规范为2,4-二硝基苯肼法）。 （五）关于注册检验使用有证参考物质说明：本指导原则编写过程中充分参考了产品专业厂家代表意见，丙氨酸氨基转移酶测定试剂盒配套校准品可溯源至国家标准物质（GBW(E)090593）或国际标准物质（ERM®-AD454/IFCC），故建议注册检验应当使用国家参考品或国际参考物质进行注册检验，并符合相关要求。 （六）关于综述资料、产品说明书中有关与丙氨酸氨基转移酶检测相关的临床适应症背景的说明：临床意义的描述参考自《全国临床检验操作规程（第4版）》 （七）关于参考区间的验证资料中对健康个体至少120例的说明：此例数的规定，结合已发布产品技术审查指导原则，并参考《WS/T 402-2012临床实验室检验项目参考区间的制定》以及《C28-A2 如何确定临床检验的参考区间：批准指南（2000）》。 （八）产品的原材料选择、生产工艺、使用方法等因素，需按照企业的研发资料设计，企业的注册资料中应包括此方面的研究资料，由于各企业对产品的研发情况不一定相同，故本指导原则中不作强制性要求，注册审评人员应按照企业具体的研究资料进行审查。 三、编写人员 本指导原则编写人员由浙江省医疗器械技术审评人员、行政审批人员、检验和临床专家、产品专业厂家代表等共同组成，起草过程中广泛征求了国家总局医疗器械技术审评中心、相关省局、有关体外诊断试剂生产企业和临床使用单位的意见，以充分利用各方面的信息和资源，综— 22 — 合考虑指导原则中各个方面的内容，尽量保证指导原则可操作性和指导性。第二篇：C-反应蛋白检测试剂盒(全量程)
第三篇：甘油三酯测定试剂盒注册技术审查指导原则
第四篇：乳酸脱氢酶测定试剂盒注册技术审查指导原则
第五篇：6 丙氨酸氨基转移酶测定试剂盒注册技术审查指导原则(征求意见稿)
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